缩略语表 | 第5-7页 |
中文摘要 | 第7-11页 |
ABSTRACT | 第11-15页 |
前言 | 第16-17页 |
文献回顾 | 第17-32页 |
第一部分 恶性胶质瘤细胞TRAIL敏感性相关的MICRORNA的筛选、功能鉴定及机制研究 | 第32-76页 |
1 实验材料 | 第33-37页 |
1.1 细胞株 | 第33页 |
1.2 主要试剂 | 第33-34页 |
1.3 主要仪器 | 第34页 |
1.4 主要引物及序列合成 | 第34-36页 |
1.5 肿瘤组织样品 | 第36页 |
1.6 实验动物 | 第36-37页 |
2 实验方法 | 第37-46页 |
2.1 细胞培养 | 第37页 |
2.2 细胞转染 | 第37页 |
2.3 双荧光素酶报告基因实验 | 第37-38页 |
2.4 蛋白质印迹(Western Blot) | 第38-39页 |
2.5 总RNA的提取 | 第39页 |
2.6 胶质瘤临床样品中总RNA的提取 | 第39页 |
2.7 反转录和实时定量PCR | 第39页 |
2.8 细胞凋亡检测 | 第39-40页 |
2.9 Transwell细胞迁移实验 | 第40页 |
2.10 成骨诱导分化实验 | 第40-41页 |
2.11 成脂诱导分化实验 | 第41页 |
2.12 活细胞工作站监测 | 第41-42页 |
2.13 细胞共培养实验 | 第42页 |
2.14 外泌体分离提取实验 | 第42-43页 |
2.15 小鼠皮下荷瘤及尾静脉治疗 | 第43页 |
2.16 小鼠瘤体及组织的取材与H&E染色 | 第43页 |
2.17 免疫组织化学检测 | 第43-44页 |
2.18 TUNEL凋亡检测 | 第44页 |
2.19 统计学分析 | 第44-46页 |
3 实验结果 | 第46-73页 |
3.1 恶性脑胶质瘤细胞TRAIL敏感性相关miRNA的全基因组筛选与分析 | 第46-49页 |
3.2 miR-7增强肿瘤细胞的TRAIL促凋亡敏感性 | 第49-52页 |
3.3 TRAIL敏感性相关miR-7下游靶基因的筛选与鉴定 | 第52-56页 |
3.4 XIAP是miR-7增强TRAIL促凋亡调控轴中的关键分子 | 第56-60页 |
3.5 基因修饰间充质干细胞稳转细胞系的建立 | 第60-64页 |
3.6 间充质干细胞稳转细胞系通过外泌体影响胶质瘤细胞对TRAIL的凋亡敏感性 | 第64-67页 |
3.7 基因修饰间充质干细胞细胞系肿瘤趋向性的分析 | 第67-69页 |
3.8 TRAIL-miR-7联合表达的间充质干细胞体内抑瘤的效果评价 | 第69-73页 |
4 讨论 | 第73-76页 |
第二部分 microRNA-7在肝癌细胞中的抑癌新机制研究 | 第76-96页 |
1 实验材料 | 第77-80页 |
1.1 细胞株 | 第77页 |
1.2 主要试剂 | 第77页 |
1.3 主要仪器 | 第77-78页 |
1.4 主要引物及序列合成 | 第78-79页 |
1.5 肿瘤组织样品 | 第79-80页 |
2 实验方法 | 第80-84页 |
2.1 细胞培养 | 第80页 |
2.2 细胞转染 | 第80页 |
2.3 双荧光素酶报告基因实验 | 第80-81页 |
2.4 蛋白质印迹(Western Blot) | 第81-82页 |
2.5 总RNA的提取 | 第82页 |
2.6 反转录和实时定量PCR | 第82页 |
2.7 细胞周期检测 | 第82-83页 |
2.8 统计学分析 | 第83-84页 |
3 实验结果 | 第84-94页 |
3.1 过表达miR-7可导致肝癌细胞周期G1期阻滞 | 第84-86页 |
3.2 细胞周期蛋白CCNE1是miR-7的一个新的下游靶基因 | 第86-89页 |
3.3 干涉CCNE1通过G1期阻滞抑制肝癌细胞的增殖 | 第89-91页 |
3.4 CCNE1是miR-7诱导细胞周期G1期阻滞的关键下游分子 | 第91-93页 |
3.5 miR-7与CCNE1在多种肿瘤细胞系和临床肿瘤组织样品中的相关性分析 | 第93-94页 |
4 讨论 | 第94-96页 |
小结 | 第96-98页 |
参考文献 | 第98-116页 |
个人简历和研究成果 | 第116-117页 |
致谢 | 第117-118页 |