| 中文摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 缩略词表 | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-25页 |
| 1 IL-33 发现与命名 | 第16页 |
| 2 IL-33 的分子结构和编码蛋白 | 第16页 |
| 3 IL-33 产生及调节 | 第16-17页 |
| 4 IL-33 受体及信号传导 | 第17-18页 |
| ·受体基因结构及表达 | 第17页 |
| ·受体蛋白结构 | 第17-18页 |
| ·信号转导途径 | 第18页 |
| 5 IL-33 生物学活性及其在相关疾病中的作用 | 第18-20页 |
| 6 本研究的目的和内容 | 第20页 |
| 参考文献 | 第20-25页 |
| 第1章 小鼠IL-33 基因的克隆及序列分析 | 第25-38页 |
| 1 材料与方法 | 第25-32页 |
| ·材料 | 第25-27页 |
| ·质粒、菌株和实验动物 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·主要溶液 | 第26-27页 |
| ·RNA操作有关溶液的配置和处理 | 第27页 |
| ·RNA操作有关器皿的处理 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-32页 |
| ·引物设计与合成 | 第27-28页 |
| ·小鼠脊髓总RNA提取 | 第28-29页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第29页 |
| ·胶回收纯化目的基因片段 | 第29页 |
| ·PCR产物的克隆连接 | 第29-30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·转化 | 第30-31页 |
| ·表达载体的构建 | 第31页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的小量快速制备及酶切法鉴定 | 第32页 |
| ·重组质粒的序列分析 | 第32页 |
| 2 结果 | 第32-35页 |
| ·小鼠脊髓总RNA制备及RT-PCR扩增 | 第32页 |
| ·质粒构建 | 第32-33页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第33页 |
| ·重组质粒的酶切法鉴定 | 第33-35页 |
| ·重组质粒的序列分析 | 第35页 |
| 3 讨论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-38页 |
| 第2章 小鼠IL-33 的原核表达、纯化与鉴定 | 第38-49页 |
| 1 材料与方法 | 第38-43页 |
| ·材料 | 第38-41页 |
| ·质粒与细胞 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·主要溶液 | 第39-41页 |
| ·方法 | 第41-43页 |
| ·引物设计与合成 | 第41页 |
| ·mIL-33 成熟蛋白基因的PCR扩增 | 第41页 |
| ·表达载体的构建 | 第41页 |
| ·工程菌的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白mIL-33 可溶性分析 | 第42页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第42页 |
| ·目的蛋白的含量与SDS-PAGE分析 | 第42页 |
| ·Western blot分析 | 第42-43页 |
| ·mIL-33 的生物学活性分析 | 第43页 |
| 2 结果 | 第43-46页 |
| ·表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第44页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的鉴定 | 第45页 |
| ·m IL-33 的活性分析 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-49页 |
| 第3章 兔抗小鼠IL-33 多克隆抗体的制备、纯化及鉴定 | 第49-58页 |
| 1 材料与方法 | 第49-53页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·实验动物 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器及设备 | 第49页 |
| ·主要溶液 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-53页 |
| ·小鼠IL-33 蛋白的原核表达、纯化及鉴定 | 第50-51页 |
| ·抗血清的制备 | 第51页 |
| ·ELISA检测抗血清效价 | 第51页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第51-52页 |
| ·免疫印迹分析 | 第52页 |
| ·免疫组织化学检测 | 第52-53页 |
| 2 结果 | 第53-55页 |
| ·m IL-33 蛋白的原核表达、纯化及鉴定 | 第53页 |
| ·ELISA检测抗血清效价及抗体的纯化 | 第53页 |
| ·免疫印迹分析 | 第53页 |
| ·免疫组织化学检测 | 第53-55页 |
| 3 讨论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-58页 |
| 第4章 抗IL-33 抗体在类风湿性关节炎中的作用 | 第58-65页 |
| 1 材料与方法 | 第58-60页 |
| ·材料 | 第58-59页 |
| ·实验动物 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58-59页 |
| ·主要仪器 | 第59页 |
| ·主要溶液 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-60页 |
| ·CIA模型建立及抗IL-33 多克隆抗体注射 | 第59-60页 |
| ·流式细胞术(Flow cytometry，FCM)检测小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞亚群 | 第60页 |
| ·组织病理学分析 | 第60页 |
| 2 结果 | 第60-62页 |
| ·Ⅱ型胶原诱导的C57BL/6 小鼠关节炎及抗IL-33 抗体对CIA模型关节炎症的影响 | 第60-61页 |
| ·FCM检测小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞亚群 | 第61-62页 |
| ·组织病理学分析 | 第62页 |
| 3 讨论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 附录A 抗IL-33 抗体抑制哮喘气道炎症 | 第66-77页 |
| 1 材料与方法 | 第66-70页 |
| ·材料 | 第66-67页 |
| ·实验动物 | 第66页 |
| ·主要试剂 | 第66-67页 |
| ·主要仪器 | 第67页 |
| ·主要溶液 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-70页 |
| ·小鼠哮喘模型的制作及抗IL-33 多克隆抗体的注射 | 第67-68页 |
| ·肺泡灌洗液的收集及细胞计数与分类 | 第68-69页 |
| ·组织病理学分析 | 第69页 |
| ·血清中IgE抗体水平的检测 | 第69-70页 |
| ·统计学处理 | 第70页 |
| 2 结果 | 第70-72页 |
| ·鼻腔给药方法的可行性分析 | 第70页 |
| ·抗IL-33 多克隆抗体对哮喘模型气道炎症的影响 | 第70页 |
| ·组织病理学分析 | 第70页 |
| ·肺泡灌洗液中细胞因子的检测 | 第70-71页 |
| ·血清中IgE抗体水平的检测 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 附录B 抗IL-33 抗体在小鼠EAE的作用 | 第77-85页 |
| 1 材料与方法 | 第77-79页 |
| ·材料 | 第77-78页 |
| ·实验动物 | 第77页 |
| ·主要试剂 | 第77页 |
| ·主要仪器 | 第77-78页 |
| ·方法 | 第78-79页 |
| ·小鼠EAE模型的诱导 | 第78页 |
| ·pcDNA3.1-mIL-33 质粒及抗IL-33 多克隆抗体的注射 | 第78页 |
| ·血清收集及脾脏细胞培养上清细胞因子检测 | 第78-79页 |
| ·组织病理检查 | 第79页 |
| ·统计学处理 | 第79页 |
| 2 结果 | 第79-81页 |
| ·小鼠发病情况 | 第79-80页 |
| ·细胞因子的检测 | 第80-81页 |
| ·组织切片的HE (hematoxylin-eosin)及LFB染色 | 第81页 |
| 3 讨论 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第86-87页 |
| 个人简历 | 第87页 |
