| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-42页 |
| 1. AKT细胞信号途径 | 第13-37页 |
| ·Akt蛋白激酶的发现和结构 | 第13-15页 |
| ·Akt蛋白激酶的激活与失活机制及生物学功能 | 第15-18页 |
| ·Akt信号途径的生物学功能 | 第18-37页 |
| 2. 氧化应激诱导的细胞凋亡与AKT信号途径 | 第37-42页 |
| ·氧化应激与人类疾病 | 第37-40页 |
| ·氧化应激诱导的细胞凋亡与Akt信号途径 | 第40-42页 |
| 第二章 AKT蛋白激酶家族分子在不同胚胎发育时期及成年期小鼠眼球不同组织中的表达模式和活性水平分析 | 第42-54页 |
| 1. 实验材料、化学试剂及设备仪器 | 第42页 |
| 2. 常规实验方法 | 第42-49页 |
| ·免疫组织化学 | 第42-43页 |
| ·蛋白质印记(Western Blot) | 第43-46页 |
| ·逆转录PCR(RT-PCR) | 第46-48页 |
| ·数据统计学分析 | 第48-49页 |
| 3. 实验结果 | 第49-54页 |
| ·三种Akt家族分子在不同胚胎发育时期中小鼠眼球不同组织中的免疫荧光结果分析 | 第49页 |
| ·三种Akt家族分子成年小鼠眼球不同组织中的RT-PCR结果分析 | 第49-51页 |
| ·三种Akt家族分子成年小鼠眼球不同组织中的Western Blot结果分析 | 第51-52页 |
| ·Akt蛋白激酶在成年小鼠小鼠眼球不同组织中的活性水平分析 | 第52-54页 |
| 第三章 AKT1 KNOCKDOWN、AKT2 KNOCKDOWN、AKT1/2KNOCKDOWN HLE稳定细胞系及其他相关细胞系的建立 | 第54-74页 |
| 1. 实验材料、化学试剂及仪器设备 | 第54页 |
| 2. 常规实验方法 | 第54-64页 |
| ·脂质体Lipofectamin 2000介导的哺乳动物细胞转染 | 第54-55页 |
| ·表达载体的构建 | 第55-63页 |
| ·细胞蛋白质提取及Western Blot分析 | 第63-64页 |
| 3. 实验结果 | 第64-74页 |
| ·Akt1 knockdown HLE稳定细胞系及对照Mock knockdownHLE稳定细胞系的建立 | 第64-65页 |
| ·Mock shRNA-Bak shRNA稳定细胞系的建立 | 第65-66页 |
| ·pCI-neo-Bim表达质粒的构建 | 第66-68页 |
| ·Akt1shRNA-Bim-HLE稳定细胞系的建立 | 第68-69页 |
| ·pCI-neo-MCL-1表达质粒的构建 | 第69-72页 |
| ·MockshRNA-MCL-1-HLE稳定细胞系的建立 | 第72页 |
| ·Akt2 knockdown HLE稳定细胞系的建立 | 第72页 |
| ·Akt1/2 knockdown HLE稳定细胞系的建立 | 第72-74页 |
| 第四章 HLE细胞中AKT1 SHRNA靶向沉默引起AKT2的上调及AKT蛋白激酶活性显著上升从而增强抵抗过氧化氢引起细胞凋亡的能力 | 第74-88页 |
| 1. 实验材料、化学试剂及设备仪器 | 第74页 |
| 2. 常规实验方法 | 第74-79页 |
| ·过氧化氢处理细胞 | 第74页 |
| ·细胞Hoechst染色 | 第74-75页 |
| ·流式细胞检测细胞凋亡 | 第75-76页 |
| ·MTT法检测细胞凋亡 | 第76-77页 |
| ·哺乳动物细胞的瞬时转染 | 第77页 |
| ·细胞蛋白质的提取及Western Blot分析 | 第77页 |
| ·Akt蛋白激酶活性分析 | 第77-78页 |
| ·数据统计学分析 | 第78-79页 |
| 3. 实验结果 | 第79-88页 |
| ·HLE细胞中Akt1 shRNA靶向沉默显著增强抵抗过氧化氢引起细胞凋亡的能力 | 第79-82页 |
| ·HLE细胞中Akt1 shRNA靶向沉默引起Akt2上调以及激酶活性水平的上升 | 第82-88页 |
| 第五章 AKT蛋白激酶调控MDM2-P53-BAK,GSK3B-MCL-1和FOXO3A-BIM三条信号途径抵抗AKT1 KNOCKDOWN HLE细胞在氧化应激下的细胞凋亡 | 第88-99页 |
| 1. 实验材料、化学试剂及仪器设备 | 第88页 |
| 2. 常规实验方法 | 第88页 |
| 3. 实验结果 | 第88-99页 |
| ·Akt蛋白激酶对MDM-2-p53-Bak促细胞凋亡信号途径的负调控参与Akt1 shRNA靶向沉默抵抗氧化应激诱导细胞凋亡的分子机制 | 第88-92页 |
| ·Akt蛋白激酶对GSK3β-MCL-1促细胞存活信号途径的正调控参与Akt1 shRNA靶向沉默抵抗氧化应激诱导细胞凋亡的分子机制 | 第92-95页 |
| ·Akt蛋白激酶对FOXO3A-Bim促细胞凋亡信号途径的负调控参与Akt1 shRNA靶向沉默抵抗氧化应激诱导细胞凋亡的分子机制 | 第95-99页 |
| 第六章 AKT2是HLE细胞中在氧化应激下调控细胞信号途径促进细胞存活的主要AKT蛋白激酶 | 第99-115页 |
| 1. 实验材料、化学试剂及设备仪器 | 第99页 |
| 2. 常规实验方法 | 第99页 |
| 3. 实验结果 | 第99-115页 |
| ·HLE细胞中Akt2 shRNA靶向沉默显著增强过氧化氢引起的细胞凋亡率 | 第99-100页 |
| ·MDM2-p53-Bak,GSK3β-MCL-1及FOXO3A-Bim信号途径参与Akt2 shRNA靶向沉默上调HLE细胞中过氧化氢引起的细胞凋亡率 | 第100-106页 |
| ·HLE细胞中Akt1/2 knockdown逆转了Akt1 knockdown增强细胞抵抗氧化应激的能力,并显著增强过氧化氢引起的细胞凋亡率 | 第106-109页 |
| ·Akt1/2 knockdown HLE细胞中MDM2-p53-Bak,GSK3β-MCL-1 和FOXO3A-Bim信号途径参与过氧化氢引起细胞凋亡率的显著上升 | 第109-113页 |
| ·HLE细胞中Akt2的过表达能增强细胞抵抗过氧化氢引起细胞凋亡的能力 | 第113-115页 |
| 第七章 总结、讨论与研究展望 | 第115-126页 |
| 1. 总结 | 第115-117页 |
| 2. 讨论及研究展望 | 第117-126页 |
| ·Akt2是HLE细胞中调控细胞生理活动抵抗氧化应激诱导细胞凋亡的主要Akt蛋白激酶分子 | 第117-120页 |
| ·Akt蛋白激酶调控MDM2-p53-Bak,GSK3β-MCL-1及FOXO3A-Bim三条信号途径对抗氧化应激诱导的细胞凋亡 | 第120-124页 |
| ·本论文研究的理论意义及实际应用价值 | 第124-126页 |
| 参考文献 | 第126-154页 |
| 博士学习期间撰写、发表的主要论文及获奖情况 | 第154-157页 |
| 致谢 | 第157-159页 |
