| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 1. 前言 | 第13-28页 |
| ·国内外化学杀虫剂类型 | 第13-17页 |
| ·化学杀虫剂在农业病虫害防治中的优点 | 第14-15页 |
| ·化学杀虫剂存在问题 | 第15-17页 |
| ·国内外生物杀虫剂发展现状 | 第17-19页 |
| ·生物杀虫剂在农业病虫害防治中的优点 | 第17-18页 |
| ·生物杀虫剂存在问题 | 第18-19页 |
| ·BT毒蛋白基因的研究进展 | 第19-22页 |
| ·BT毒蛋白基因分类 | 第20页 |
| ·杀虫机理 | 第20-21页 |
| ·遗传工程菌研究 | 第21-22页 |
| ·CpTI研究进展 | 第22-23页 |
| ·CpTI杀虫机制 | 第22-23页 |
| ·cpti在抗虫基因工程中的应用 | 第23页 |
| ·融合基因及融合蛋白在植物抗病虫害中的研究进展 | 第23页 |
| ·斜纹夜蛾生物学特性及防治研究 | 第23-25页 |
| ·斜纹夜蛾生物学特性 | 第23-24页 |
| ·斜纹夜蛾防治 | 第24-25页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| ·具体研究内容及实验技术路线 | 第26-28页 |
| ·具体研究内容 | 第26页 |
| ·研究技术路线 | 第26-28页 |
| 2. 材料与方法 | 第28-44页 |
| ·试验材料 | 第28-30页 |
| ·菌株与质粒 | 第28页 |
| ·主要生化试剂 | 第28页 |
| ·供试农药 | 第28-29页 |
| ·供试虫源 | 第29页 |
| ·常用培养基、试剂、缓冲液配方 | 第29-30页 |
| ·常用培养基配方 | 第29页 |
| ·常用试剂配方 | 第29-30页 |
| ·主要实验仪器 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-44页 |
| ·BT cry1Aa-cpti融合基因的克隆及其DNA序列鉴定 | 第30-36页 |
| ·BT cry1Aa-cpti融合基因的克隆引物设计 | 第30-31页 |
| ·BT cry1Aa-cpti基因模板的获得 | 第31页 |
| ·BT cry1Aa-cpti不含Nde Ⅰ和Sal Ⅰ酶切位点基因的克隆 | 第31-32页 |
| ·BT cry1Aa-cpti含NdeⅠ和Sal Ⅰ酶切位点基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·PCR产物的回收 | 第33页 |
| ·BT cry1Aa-cpti PCR product与克隆载体pMD18-T的连接 | 第33-34页 |
| ·E.coli DH5a感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第34页 |
| ·重组质粒DNA的初步筛选 | 第34-35页 |
| ·重组质粒DNA的小量制备 | 第35-36页 |
| ·BT cry1Aa-cpti基因克隆载体的鉴定 | 第36页 |
| ·Cry1Aa-CpTI融合蛋白原核表达载体的构建 | 第36-39页 |
| ·pET-30a-cry1Aa-cpti融合蛋白表达载体的构建 | 第36-39页 |
| ·pET-30a-cry1Aa-cpti融合蛋白表达载体鉴定 | 第39页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中的表达及高效表达条件的建立 | 第39-42页 |
| ·工程菌株BL21(DE3)/pET-30a-cry1Aa-cpti的构建 | 第39-40页 |
| ·Cry1Aa-CpTI融合蛋白在大肠杆菌中的表达及高效表达条件的建立 | 第40-42页 |
| ·Cry1Aa-CpTI融合蛋白包涵体的纯化 | 第42页 |
| ·Cry1Aa-CpTI融合蛋白稳定性分析 | 第42页 |
| ·Cry1 Aa-CpTI融合蛋白杀虫活性的初试方法 | 第42-43页 |
| ·Cry1Aa-CpTI融合蛋白对斜纹夜蛾拒食作用实验 | 第43页 |
| ·甲维盐和毒死蜱2种农药对斜纹夜蛾幼虫的室内毒力测定 | 第43-44页 |
| ·Cry1Aa-CpTI融合蛋白饲喂24h后,2种农药对斜纹夜蛾幼虫的室内毒力 | 第44页 |
| 3. 结果与分析 | 第44-60页 |
| ·BT cry1Aa-cpti融合基因的获得与鉴定 | 第44-47页 |
| ·BT cry1Aa-cpti融合基因的获得 | 第44-45页 |
| ·引入Nde Ⅰ和Sal Ⅰ酶切位点的BT cry1Aa-cpti融合基因的获得 | 第45页 |
| ·克隆载体pMD18T-cry1Aa-cpti构建 | 第45-46页 |
| ·BT cry1Aa-cpti融合基因酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·表达载体pET-30a-cry1Aa-cpti的构建 | 第47-50页 |
| ·pET-30a双酶切 | 第47-48页 |
| ·表达载体pET-30a-cry1Aa-cpti的构建 | 第48-49页 |
| ·表达载体pET-30a-cry1Aa-cpti鉴定 | 第49-50页 |
| ·表达载体pET-30a-cry1Aa-cpti双酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·表达载体pET-30a-cry1Aa-cpti测序 | 第50页 |
| ·工程菌株BL21(DE3)/pET-30a-cry1Aa-cpti的构建 | 第50页 |
| ·Cry1Aa-CpTI融合蛋白的诱导表达及表达条件的优化 | 第50-53页 |
| ·Cry1Aa-CpTI融合蛋白的诱导表达 | 第50-51页 |
| ·Cry1Aa-CpTI融合蛋白的诱导表达条件的优化 | 第51-53页 |
| ·重组蛋白表达方式分析及包涵体的纯化 | 第53-54页 |
| ·Cry1Aa-CpTI融合蛋白稳定性分析结果 | 第54-55页 |
| ·Cry1Aa-CpTI融合蛋白杀虫活性的初试结果 | 第55-56页 |
| ·Cry1Aa-CpTI融合蛋白对斜纹夜蛾的拒食作用测定 | 第56-57页 |
| ·甲维盐和毒死蜱农药饲料混毒法毒力测定结果 | 第57-58页 |
| ·使用Cry1Aa-CpTI蛋白24h后,甲维盐和毒死蜱饲料混毒法毒力测定结果 | 第58-60页 |
| 4. 讨论 | 第60-63页 |
| ·Cry1Aa-CpTI融合蛋白载体构建 | 第60页 |
| ·关于融合蛋白诱导条件的优化 | 第60-61页 |
| ·关于Cry1Aa-CpTI纯化及稳定性 | 第61页 |
| ·关于Cry1Aa-CpTI融合蛋白能降低有毒农药的使用量的问题 | 第61-63页 |
| 5. 结论 | 第63-64页 |
| 6. 参考文献 | 第64-68页 |
| 附录1:cry1Aa-cpti融合基因DNA序列 | 第68-69页 |
| 附录2:Cry1Aa-CpTI融合蛋白AA序列 | 第69页 |
| 附录3:Cry1Aa-CpTI融合蛋白AA统计 | 第69页 |
| 附录4:pMD18-T Simple克隆载体图谱 | 第69-70页 |
| 附录5:pET-30a表达载体图谱 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
