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Ezrin介导NGX6a蛋白降解促进了鼻咽癌细胞侵袭转移的分子机制研究

摘要第1-9页
ABSTRACT第9-16页
目录第16-18页
缩写词简表第18-20页
第一章 前言第20-23页
技术路线第23-24页
第二章 材料与方法第24-46页
 1 材料第24-28页
   ·细胞第24页
   ·菌株和质粒载体第24-25页
   ·试剂第25-27页
   ·主要仪器第27-28页
 2 方法第28-46页
   ·pET28b-NGX6ΔTM2载体的构建第28-30页
   ·His-NGX6ΔTM2融合蛋白的诱导第30-33页
   ·NGX6多克隆抗体制备第33-34页
   ·兔抗NGX6多克隆抗体的特异性鉴定第34-35页
   ·胎儿组织标本的收集与免疫组化第35页
   ·组织及培养细胞总蛋白制备第35-36页
   ·NGX6a真核表达载体的构建第36-37页
   ·基因瞬时转染第37-38页
   ·免疫荧光实验第38页
   ·激光显微切割纯化组织第38-39页
   ·稳定转染5-8F细胞系的建立第39页
   ·细胞RNA制备第39-40页
   ·Realtime RT-PCR检测NGX6a在各种鼻咽癌细胞中的表达第40-41页
   ·免疫共沉淀第41-42页
   ·Ezrin相关载体的构建第42-44页
   ·NGX6a突变体的构建第44-45页
   ·划痕试验第45页
   ·基质胶侵袭试验第45-46页
第三章 结果第46-81页
 第一部分 NGX6两个蛋白亚型的发现;NGX6蛋白在正常组织与癌组织的分布情况第46-60页
     ·原核表达载体pET28b-NGX6ΔTM2的构建第46-47页
     ·His-NGX6ΔTM2蛋白的原核表达与纯化第47-49页
     ·NGX6多克隆抗体制备与鉴定:NGX6蛋白存在两个蛋白亚型第49-51页
     ·NGX6蛋白生物信息学分析第51-53页
     ·NGX6蛋白在正常组织的分布和定位第53-57页
     ·NGX6蛋白在鼻咽癌组织中的分布第57-60页
 第二部分 NGX6a蛋白在鼻咽癌细胞中降解第60-64页
     ·NGX6a在鼻咽癌细胞系中的表达第60页
     ·NGX6a在鼻咽癌细胞系中降解第60-64页
 第三部分 Ezrin介导了NGX6a在鼻咽癌细胞中降解第64-75页
     ·Ezrin和NGX6a发生交互作用第64-65页
     ·Ezrin和NGX6a在细胞系和正常组织内表达的差异第65-68页
     ·Ezrin在鼻咽癌中表达上调第68-69页
     ·Ezrin介导了NGX6a在细胞内的降解第69-71页
     ·七跨膜区是NGX6a在细胞内降解的关键部位第71-75页
 第四部分 Ezrin通过降解NGX6a促进鼻咽癌细胞侵袭转移第75-81页
     ·瞬时转染NGX6a可以抑制鼻咽癌细胞的运动和侵袭能力第75-77页
     ·NGX6a的降解对于Ezrin促进鼻咽癌细胞的侵袭转移具有关键作用第77-78页
     ·光辉霉素和MG132能抑制鼻咽癌细胞的侵袭转移能力第78-81页
第四章 讨论第81-101页
 第一部分 NGX6a的发现,NGX6a在鼻咽癌中下调第81-86页
     ·制备NGX6基因多克隆抗体,为NGX6蛋白的特性与功能鉴定打下基础第81-83页
     ·NGX6蛋白在人体组织和鼻咽癌组织的分布模式及其意义第83-86页
 第二部分 Ezrin介导了NGX6a在鼻咽癌中的降解的生物学意义第86-94页
     ·NGX6a蛋白在细胞中经蛋白酶体降解,但不能被泛素化第86-90页
     ·Ezrin介导了NGX6a在鼻咽癌细胞中的生物学意义第90-94页
 第三部分 抑制Ezrin,增加NGX6a的表达可以抑制鼻咽癌细胞的侵袭转移能力第94-101页
     ·瞬时转染NGX6a可以抑制鼻咽癌细胞的运动和侵袭能力第94-95页
     ·NGX6a的降解对于Ezrin促进鼻咽癌细胞的侵袭转移具有关键作用第95-98页
     ·光辉霉素和MG132联合使用的临床意义第98-101页
结论第101-102页
参考文献第102-114页
综述第114-129页
致谢第129-130页
个人简历第130-132页

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