| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-16页 |
| 目录 | 第16-18页 |
| 缩写词简表 | 第18-20页 |
| 第一章 前言 | 第20-23页 |
| 技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-46页 |
| 1 材料 | 第24-28页 |
| ·细胞 | 第24页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第24-25页 |
| ·试剂 | 第25-27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| 2 方法 | 第28-46页 |
| ·pET28b-NGX6ΔTM2载体的构建 | 第28-30页 |
| ·His-NGX6ΔTM2融合蛋白的诱导 | 第30-33页 |
| ·NGX6多克隆抗体制备 | 第33-34页 |
| ·兔抗NGX6多克隆抗体的特异性鉴定 | 第34-35页 |
| ·胎儿组织标本的收集与免疫组化 | 第35页 |
| ·组织及培养细胞总蛋白制备 | 第35-36页 |
| ·NGX6a真核表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·基因瞬时转染 | 第37-38页 |
| ·免疫荧光实验 | 第38页 |
| ·激光显微切割纯化组织 | 第38-39页 |
| ·稳定转染5-8F细胞系的建立 | 第39页 |
| ·细胞RNA制备 | 第39-40页 |
| ·Realtime RT-PCR检测NGX6a在各种鼻咽癌细胞中的表达 | 第40-41页 |
| ·免疫共沉淀 | 第41-42页 |
| ·Ezrin相关载体的构建 | 第42-44页 |
| ·NGX6a突变体的构建 | 第44-45页 |
| ·划痕试验 | 第45页 |
| ·基质胶侵袭试验 | 第45-46页 |
| 第三章 结果 | 第46-81页 |
| 第一部分 NGX6两个蛋白亚型的发现;NGX6蛋白在正常组织与癌组织的分布情况 | 第46-60页 |
| ·原核表达载体pET28b-NGX6ΔTM2的构建 | 第46-47页 |
| ·His-NGX6ΔTM2蛋白的原核表达与纯化 | 第47-49页 |
| ·NGX6多克隆抗体制备与鉴定:NGX6蛋白存在两个蛋白亚型 | 第49-51页 |
| ·NGX6蛋白生物信息学分析 | 第51-53页 |
| ·NGX6蛋白在正常组织的分布和定位 | 第53-57页 |
| ·NGX6蛋白在鼻咽癌组织中的分布 | 第57-60页 |
| 第二部分 NGX6a蛋白在鼻咽癌细胞中降解 | 第60-64页 |
| ·NGX6a在鼻咽癌细胞系中的表达 | 第60页 |
| ·NGX6a在鼻咽癌细胞系中降解 | 第60-64页 |
| 第三部分 Ezrin介导了NGX6a在鼻咽癌细胞中降解 | 第64-75页 |
| ·Ezrin和NGX6a发生交互作用 | 第64-65页 |
| ·Ezrin和NGX6a在细胞系和正常组织内表达的差异 | 第65-68页 |
| ·Ezrin在鼻咽癌中表达上调 | 第68-69页 |
| ·Ezrin介导了NGX6a在细胞内的降解 | 第69-71页 |
| ·七跨膜区是NGX6a在细胞内降解的关键部位 | 第71-75页 |
| 第四部分 Ezrin通过降解NGX6a促进鼻咽癌细胞侵袭转移 | 第75-81页 |
| ·瞬时转染NGX6a可以抑制鼻咽癌细胞的运动和侵袭能力 | 第75-77页 |
| ·NGX6a的降解对于Ezrin促进鼻咽癌细胞的侵袭转移具有关键作用 | 第77-78页 |
| ·光辉霉素和MG132能抑制鼻咽癌细胞的侵袭转移能力 | 第78-81页 |
| 第四章 讨论 | 第81-101页 |
| 第一部分 NGX6a的发现,NGX6a在鼻咽癌中下调 | 第81-86页 |
| ·制备NGX6基因多克隆抗体,为NGX6蛋白的特性与功能鉴定打下基础 | 第81-83页 |
| ·NGX6蛋白在人体组织和鼻咽癌组织的分布模式及其意义 | 第83-86页 |
| 第二部分 Ezrin介导了NGX6a在鼻咽癌中的降解的生物学意义 | 第86-94页 |
| ·NGX6a蛋白在细胞中经蛋白酶体降解,但不能被泛素化 | 第86-90页 |
| ·Ezrin介导了NGX6a在鼻咽癌细胞中的生物学意义 | 第90-94页 |
| 第三部分 抑制Ezrin,增加NGX6a的表达可以抑制鼻咽癌细胞的侵袭转移能力 | 第94-101页 |
| ·瞬时转染NGX6a可以抑制鼻咽癌细胞的运动和侵袭能力 | 第94-95页 |
| ·NGX6a的降解对于Ezrin促进鼻咽癌细胞的侵袭转移具有关键作用 | 第95-98页 |
| ·光辉霉素和MG132联合使用的临床意义 | 第98-101页 |
| 结论 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-114页 |
| 综述 | 第114-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 个人简历 | 第130-132页 |
