| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| ·大豆概述 | 第11页 |
| ·大豆主要病虫害 | 第11-12页 |
| ·大豆转基因研究现状 | 第12-13页 |
| ·大豆转基因主要方法 | 第13-15页 |
| ·农杆菌介导转化法 | 第13页 |
| ·基因枪法 | 第13-14页 |
| ·花粉管通道法 | 第14页 |
| ·显微注射法(microinjection) | 第14-15页 |
| ·电击法 | 第15页 |
| ·抗虫转基因研究进展 | 第15-17页 |
| ·国外Bt 转基因工程研究进展 | 第15-16页 |
| ·国内Bt 转基因工程研究进展 | 第16-17页 |
| ·其他抗虫转基因研究进展 | 第17页 |
| ·发根农杆菌研究进展 | 第17-19页 |
| ·发根农杆菌的生物学特性 | 第17-18页 |
| ·发根农杆菌转化方法 | 第18页 |
| ·发根农杆菌的应用 | 第18-19页 |
| ·研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-35页 |
| ·试验材料 | 第21-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21-22页 |
| ·酶及试剂 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·实验引物 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-27页 |
| ·农杆菌的培养和菌种的保存 | 第23页 |
| ·发根农杆菌感受态细胞制备 | 第23页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备与转化 | 第23-24页 |
| ·农杆菌质粒DNA 的提取 | 第24页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA 的提取 | 第24页 |
| ·DNA 回收Kit 法（百泰克多功能DNA 纯化回收试剂盒） | 第24-25页 |
| ·pCAMBIA1305.1-355-8e 载体构建与鉴定 | 第25-27页 |
| ·发根农杆菌介导的子叶节转化体系的优化 | 第27-28页 |
| ·十个不同基因型大豆转化效率统计分析 | 第27-28页 |
| ·转化根系的检测方法 | 第28-34页 |
| ·GUS 活性检测 | 第28-29页 |
| ·基因组DNA PCR 检测 | 第29-30页 |
| ·基因组蛋白检测分析 | 第30-32页 |
| ·Western blot 分析 | 第32-34页 |
| ·转化率的统计方法 | 第34页 |
| ·数据分析 | 第34页 |
| ·阳性根的扩繁 | 第34页 |
| ·阳性根的选择 | 第34页 |
| ·固体扩繁 | 第34页 |
| ·液体扩繁 | 第34页 |
| ·生物活性检测 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-45页 |
| ·载体验证结果 | 第35-36页 |
| ·含Cry8e 基因的菌落PCR 结果 | 第35页 |
| ·双酶切验证结果 | 第35-36页 |
| ·pCAMBIA1305. 1-355-8e 质粒交叉双酶切验证结果 | 第36页 |
| ·pCAMBIA1305. 1-355-8e 质粒T-DNA 结构图谱 | 第36页 |
| ·不同基因型不同转化条件转化效率统计分析结果 | 第36-39页 |
| ·不同基因型大豆产生发状根时间 | 第36-37页 |
| ·不同基因型大豆转化效率统计结果 | 第37-38页 |
| ·不同共培养方式对转化效率的影响 | 第38-39页 |
| ·不同潮霉素浓度对转化效率的影响 | 第39页 |
| ·阳性根的获得与扩繁 | 第39-40页 |
| ·转化根系的分子检测 | 第40-42页 |
| ·GUS 基因表达检测 | 第40-41页 |
| ·转基因发状根的PCR 检测 | 第41页 |
| ·转基因发状根的Western blot 检测 | 第41-42页 |
| ·生物活性测定 | 第42-45页 |
| 4 小结与讨论 | 第45-47页 |
| ·发根农杆菌转化体系的优化 | 第45页 |
| ·Cry8e 基因的验证分析 | 第45-47页 |
| 5 展望 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第56-57页 |
