| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-19页 |
| 1.1 引言 | 第9页 |
| 1.2 乳酸链球菌素Nisin的功能及应用 | 第9-11页 |
| 1.3 乳酸乳球菌及其耐酸机理研究进展 | 第11页 |
| 1.4 非编码小RNA的作用方式 | 第11-15页 |
| 1.4.1 核糖开关 | 第12页 |
| 1.4.2 模拟核酸结构sRNA | 第12-13页 |
| 1.4.3 顺式编码sRNA | 第13页 |
| 1.4.4 反式编码sRNA | 第13-14页 |
| 1.4.5 双重功能sRNA | 第14页 |
| 1.4.6 耐酸相关sRNA举例 | 第14-15页 |
| 1.4.7 乳酸乳球菌中sRNA实验基础 | 第15页 |
| 1.5 人造sRNA的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.6 本论文的研究内容 | 第17-19页 |
| 第2章 耐酸相关sRNA c277的鉴定 | 第19-37页 |
| 2.1 引言 | 第19页 |
| 2.2 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.2.1 实验质粒、菌株及培养基 | 第19-20页 |
| 2.2.2 实验所用药品和试剂 | 第20-22页 |
| 2.2.3 实验仪器和设备 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.3.1 质粒的提取 | 第23页 |
| 2.3.2 乳酸乳球菌基因组提取与目的基因扩增 | 第23-24页 |
| 2.3.3 目的片段与载体的酶切及连接 | 第24-25页 |
| 2.3.4 大肠杆菌TG1感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.3.5 化学法转化感受态细胞 | 第25-26页 |
| 2.3.6 转化子的筛选与验证 | 第26页 |
| 2.3.7 RNA 提取实验 | 第26页 |
| 2.3.8 Northern blot印记杂交实验 | 第26-27页 |
| 2.3.9 RACE 实验 | 第27页 |
| 2.3.10 乳酸乳球菌F44感受态细胞的制备 | 第27页 |
| 2.3.11 电转化乳酸菌感受态细胞及转化子的筛选与验证 | 第27-28页 |
| 2.3.12 sRNA c277的敲除与过表达菌株构建 | 第28-29页 |
| 2.3.13 酸耐受实验 | 第29页 |
| 2.3.14 乳酸菌发酵实验的测定 | 第29-30页 |
| 2.3.15 nisin效价的检测 | 第30页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第30-36页 |
| 2.4.1 sRNA c277在不同pH条件下的Northern blot实验 | 第30-31页 |
| 2.4.2 RACE以及sRNA c277敲除实验 | 第31-32页 |
| 2.4.3 sRNA c277对于乳酸菌F44耐酸性的影响 | 第32-33页 |
| 2.4.4 c277对于乳酸乳球菌F44生长情况的影响 | 第33-34页 |
| 2.4.5 乳酸乳球菌F44、F44-Δ277和F44-p277发酵产酸情况分析.. | 第34-35页 |
| 2.4.6 乳酸乳球菌F44、F44-Δ277和F44-p277生产nisin情况比较 | 第35-36页 |
| 2.5 小结 | 第36-37页 |
| 第3章 sRNA c277的蛋白组分析及靶标预测 | 第37-51页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-38页 |
| 3.3.1 蛋白组检测 | 第37-38页 |
| 3.3.2 靶标预测 | 第38页 |
| 3.3.3 靶基因筛选 | 第38页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第38-49页 |
| 3.4.1 蛋白组结果 | 第38-43页 |
| 3.4.2 靶标预测结果 | 第43-47页 |
| 3.4.3 潜在靶基因初步筛选 | 第47-49页 |
| 3.5 小结 | 第49-51页 |
| 第4章 sRNA c277 靶标的验证与分析 | 第51-61页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 实验材料 | 第51页 |
| 4.2.1 实验试剂与培养基 | 第51页 |
| 4.2.2 实验药品和试剂 | 第51页 |
| 4.2.3 实验仪器和设备 | 第51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-54页 |
| 4.3.1 大肠杆菌BL21 感受态细胞的制备 | 第51-52页 |
| 4.3.2 RNA-RNA相互作用结合区域预测 | 第52页 |
| 4.3.3 连有eGfp蛋白基因的靶基因低拷贝质粒的获得 | 第52-53页 |
| 4.3.4 连有sRNA及突变sRNA的高拷贝质粒的获得 | 第53页 |
| 4.3.5 大肠杆菌双质粒系统构建 | 第53-54页 |
| 4.3.6 靶标验证实验菌株的荧光强度测定 | 第54页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第54-59页 |
| 4.4.1 靶标验证实验中融合蛋白荧光值结果 | 第54-56页 |
| 4.4.2 c277点突变实验的eGfp靶标验证结果 | 第56-57页 |
| 4.4.3 综合结果简要分析c277对于乳酸乳球菌产生的影响 | 第57-59页 |
| 4.5 小结 | 第59-61页 |
| 第5章 人工sRNA构建高产nisin菌株 | 第61-69页 |
| 5.1 引言 | 第61页 |
| 5.2 实验材料 | 第61页 |
| 5.3 实验方法 | 第61-64页 |
| 5.3.1 人造sRNA库的构建及eGfp融合蛋白实验进行筛选 | 第61-62页 |
| 5.3.2 RNA的提取、Northern blot和qRT-PCR实验 | 第62-63页 |
| 5.3.3 过表达菌株构建及酸耐受检测 | 第63-64页 |
| 5.3.4 生长曲线、发酵液pH及 nisin效价的测定 | 第64页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第64-68页 |
| 5.4.1 人造sRNA的筛选 | 第64-66页 |
| 5.4.2 过表达人工sRNA生存及产酸能力分析 | 第66-67页 |
| 5.4.3 过表达人造sRNA对nisin效价的影响 | 第67-68页 |
| 5.5 小结 | 第68-69页 |
| 第6章 结论与展望 | 第69-71页 |
| 6.1 结论 | 第69-70页 |
| 6.2 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
