| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 引言 | 第12-20页 |
| 1 Fibulin蛋白的研究 | 第12-16页 |
| 1.1 Fibulin蛋白的来源、分类与结构 | 第12-14页 |
| 1.2 Fibulin蛋白的功能 | 第14-16页 |
| 2 草鱼呼肠孤病毒研究概况 | 第16-19页 |
| 2.1 草鱼呼肠孤病毒的发现及危害 | 第16-17页 |
| 2.2 草鱼呼肠孤病毒的基因组 | 第17页 |
| 2.3 草鱼呼肠孤病毒的外衣壳蛋白 | 第17-18页 |
| 2.4 草鱼呼肠孤病毒的防控 | 第18-19页 |
| 2.4.1 草鱼呼肠孤病毒的检测方法 | 第18-19页 |
| 2.4.2 草鱼呼肠孤病毒的疫苗 | 第19页 |
| 3 本文研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第一章 杆状病毒表达Ⅱ型呼肠孤病毒外突VP56蛋白 | 第20-28页 |
| 1 材料与方法 | 第20-24页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第20页 |
| 1.2 试验病毒及细胞 | 第20页 |
| 1.3 试验试剂及药品 | 第20-21页 |
| 1.4 VP56的克隆 | 第21-23页 |
| 1.4.1 总RNA的提取及cDNA第1条链的合成 | 第21-22页 |
| 1.4.2 目的基因的扩增 | 第22-23页 |
| 1.5 pFastBacHTA-VP56的构建 | 第23页 |
| 1.5.1 连接产物的转化 | 第23页 |
| 1.5.2 阳性克隆的鉴定 | 第23页 |
| 1.6 DH10Bac感受态的制备 | 第23-24页 |
| 1.7 重组质粒pFastbacHTA-VP56的转座及杆粒的提取、鉴定 | 第24页 |
| 1.8 杆粒DNA转染昆虫细胞及WesternBlot检测重组蛋白 | 第24页 |
| 2 结果 | 第24-26页 |
| 2.1 S7目的基因的扩增及pFastBacHTA-S7的构建 | 第24-25页 |
| 2.2 杆粒DNA的鉴定 | 第25页 |
| 2.3 重组蛋白VP56的真核表达及纯化 | 第25-26页 |
| 3 讨论 | 第26-28页 |
| 第二章 Fibulin-4与GCRV-JX01的VP7,GCRV-JX02W的VP56的相互作用关系的鉴定 | 第28-46页 |
| 1 材料 | 第28-29页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第28页 |
| 1.2 试验动物 | 第28页 |
| 1.3 试验病毒及细胞 | 第28页 |
| 1.4 试验试剂及药品 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-37页 |
| 2.1 草鱼Fibulin-4基因的扩增及相关质粒的构建 | 第29-30页 |
| 2.1.1 总RNA的提取及cDNA第1条链的合成 | 第29页 |
| 2.1.2 引物设计 | 第29-30页 |
| 2.2 Fibulin-4蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备 | 第30-32页 |
| 2.2.1 Fibulin-4蛋白原核表达 | 第30页 |
| 2.2.2 诱导表达和可溶性分析 | 第30-31页 |
| 2.2.3 Fibulin-4蛋白的纯化 | 第31页 |
| 2.2.4 Fibulin-4多克隆抗体的制备 | 第31页 |
| 2.2.5 血清抗体特异性分析 | 第31-32页 |
| 2.3 GCRV-JX01的VP7,GCRV-JX02W的VP56分别与Fibulin-4在GCO细胞中的定位分析 | 第32-33页 |
| 2.3.1 GCRV-JX01的VP7RFP,GCRV-JX02W的VP56RFP与Fibulin-4GFP真核细胞的转染 | 第32-33页 |
| 2.3.2 转染后细胞进行WesternBlot验证 | 第33页 |
| 2.3.3 DAPI染色 | 第33页 |
| 2.4 GCRV-JX01的VP7,GCRV-JX02W的VP56蛋白与Fibulin-4蛋白的相互作用 | 第33-37页 |
| 2.4.1 His-VP7和His-VP56蛋白的表达与纯化 | 第33-34页 |
| 2.4.2 Dot-BlotOverlay | 第34页 |
| 2.4.3 HisPull-Down | 第34-37页 |
| 3 结果 | 第37-44页 |
| 3.1 草鱼Fibulin-4基因的扩增 | 第37页 |
| 3.2 Fibulin-4蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备 | 第37-39页 |
| 3.3 GCRV-JX01的VP7,GCRV-JX02W的VP56分别与Fibulin-4在GCO细胞中的定位分析 | 第39-40页 |
| 3.4 His-VP7和His-VP56蛋白的表达与纯化 | 第40-42页 |
| 3.5 GCRV-JX01的VP7,GCRV-JX02W的VP56蛋白与Fibulin-4蛋白的相互作用 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 病毒感染条件下Fibulin-4基因的表达研究及过表达Fibulin-4对病毒复制的影响 | 第46-54页 |
| 1 材料 | 第46-47页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第46页 |
| 1.2 试验病毒及细胞 | 第46页 |
| 1.3 所用软件 | 第46页 |
| 1.4 试验试剂及药品 | 第46-47页 |
| 2 方法 | 第47-50页 |
| 2.1 GCRV病毒感染GCO细胞过程中Fibulin-4变化情况 | 第47-49页 |
| 2.1.1 病毒感染条件下样品的收集 | 第47页 |
| 2.1.2 RNA提取 | 第47页 |
| 2.1.3 cDNA合成 | 第47-48页 |
| 2.1.4 实时荧光定量PCR | 第48-49页 |
| 2.2 过表达Fibulin-4对GCRV病毒的影响 | 第49-50页 |
| 2.2.1 稳转细胞系的构建 | 第49页 |
| 2.2.2 GCO细胞过表达Fibulin-4后感染GCRV试验 | 第49-50页 |
| 3 结果 | 第50-53页 |
| 3.1 GCRV感染GCO细胞过程中Fibulin-4表达 | 第50页 |
| 3.2 过表达Fibulin-4对GCRV的影响 | 第50-53页 |
| 4 讨论 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 附录：论文发表情况 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
