| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 1. 前言 | 第9-21页 |
| 1.1 结核病与结核分枝杆菌简介 | 第9页 |
| 1.2 Mycobacterium smegmatis | 第9-10页 |
| 1.3 Rpf家族蛋白的功能及其调控机制 | 第10-13页 |
| 1.3.1 Rpf家族蛋白功能简介 | 第10-11页 |
| 1.3.2 rpfA基因的调控机制 | 第11-13页 |
| 1.4 cAMP受体蛋白调控方式 | 第13-18页 |
| 1.4.1 转录调控因子CRP | 第13页 |
| 1.4.2 CRP的转录调控机制 | 第13-16页 |
| 1.4.3 CRP的远距离调控机制 | 第16-18页 |
| 1.5 转录因子CarD | 第18-19页 |
| 1.5.1 CarD功能简介 | 第18页 |
| 1.5.2 CarD作用机制 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 2. 材料和方法 | 第21-34页 |
| 2.1 材料 | 第21-26页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和引物 | 第21-24页 |
| 2.1.2 主要仪器试剂与耗材 | 第24-25页 |
| 2.1.3 培养基和抗生素 | 第25页 |
| 2.1.4 常用溶液的配制 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-34页 |
| 2.2.1 常规生物学实验 | 第26-28页 |
| 2.2.2 PCR扩增目的片段 | 第28页 |
| 2.2.3 Western Blot方法步骤 | 第28-29页 |
| 2.2.4 β-半乳糖苷酶活性测定 | 第29-30页 |
| 2.2.5 重叠延伸PCR | 第30-31页 |
| 2.2.6 基因无痕敲除 | 第31-32页 |
| 2.2.7 M. smegmatis中相关基因的qRT-PCR检测 | 第32-33页 |
| 2.2.8 凝胶迁移实验 | 第33-34页 |
| 3. 结果与分析 | 第34-52页 |
| 3.1 5'-RACE确定rpfA转录本的转录起始位点 | 第34-35页 |
| 3.2 rpfA与上游基因存在共转录 | 第35-36页 |
| 3.3 rpfA的5'-UTR含有ydaO核糖开关,c-di-AMP浓度降低时下游基因表达量升高 | 第36-38页 |
| 3.3.1 在M. smegmatis中Msm-1-1受c-di-AMP调控 | 第36-37页 |
| 3.3.2 在E. coli中验证Msm-1-1受c-di-AMP调控 | 第37-38页 |
| 3.4 rpfA的转录受到CRP的激活 | 第38-49页 |
| 3.4.1 CRP结合位点的预测 | 第39-40页 |
| 3.4.2 CRP结合于rpfA启动子上游区 | 第40-41页 |
| 3.4.3 CBS突变菌株的构建 | 第41页 |
| 3.4.4 rpfA表达受CRP的激活 | 第41-42页 |
| 3.4.5 crp过表达菌株的构建 | 第42-43页 |
| 3.4.6 过表达crp时rpfA表达量升高 | 第43-44页 |
| 3.4.7 CRP促进rpfA与上游基因的共转录 | 第44-47页 |
| 3.4.8 CRP能够远距离激活rpfA | 第47-49页 |
| 3.5 M. smegmatis中的CarD对rpfA的调控 | 第49-52页 |
| 3.5.1 CarD结合于rpfA启动子区 | 第49-50页 |
| 3.5.2 M. smegmatis与KIMC中carD过表达菌株的构建 | 第50页 |
| 3.5.3 CarD能够激活rpfA的表达 | 第50-52页 |
| 4. 讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
