| 中文摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 引言 | 第14-29页 |
| 1.1 HCV病毒粒子 | 第14-15页 |
| 1.2 高度变异的HCV基因组RNA | 第15-16页 |
| 1.3 HCV感染过程 | 第16-18页 |
| 1.4 HCV的防治 | 第18-20页 |
| 1.5 HCV包膜蛋白研究进展 | 第20-22页 |
| 1.6 HCV CORE蛋白研究进展 | 第22-23页 |
| 1.7 G4链体结构以及功能 | 第23-27页 |
| 1.8 研究目的 | 第27-29页 |
| 第二章 HCV分泌型E2蛋白N-糖基化修饰及其在研制免疫原性增强的HCV疫苗和单抗中的研究 | 第29-73页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-32页 |
| 2.2 主要仪器 | 第32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-49页 |
| 2.3.1 分泌型E2的不同N糖基化缺失突变体及sE2-CD19 scFV的构建 | 第32-35页 |
| 2.3.2 DNA疫苗的表达鉴定及E2蛋白的定位分析 | 第35-36页 |
| 2.3.3 DNA疫苗在小鼠体内的表达检测 | 第36页 |
| 2.3.4 原核表达sE2蛋白以及sE2-CD19 scFV蛋白制备 | 第36-38页 |
| 2.3.5 sE2-CD19 scFV靶向性的测定 | 第38页 |
| 2.3.6 去内毒素的质粒DNA疫苗的大量制备 | 第38-39页 |
| 2.3.7 疫苗免疫小鼠步骤 | 第39页 |
| 2.3.8 HCV病毒扩增、纯化以及感染复数的测定 | 第39-41页 |
| 2.3.9 免疫后特异性抗体效价的检测 | 第41页 |
| 2.3.10 ELISPOT检测T细胞内IL-4和IFN-γ的表达 | 第41-42页 |
| 2.3.11 FCM检测免疫后小鼠脾脏中E2抗原特异性CD4~+T细胞以及CD8~+T细胞的活化 | 第42-43页 |
| 2.3.12 乳酸脱氢酶释放实验检测小鼠脾脏细胞CTL功能 | 第43-44页 |
| 2.3.13 小鼠体内荷瘤实验检测体内CTL活性 | 第44页 |
| 2.3.14 流式细胞仪检测淋巴结DC中IL-10和IL-12的表达 | 第44页 |
| 2.3.15 免疫后小鼠抗血清对HCVcc的中和实验 | 第44-46页 |
| 2.3.16 sE2N2单抗的制备 | 第46-47页 |
| 2.3.17 单抗表位检测 | 第47-48页 |
| 2.3.18 单抗亚型测定、中和实验、及其与病毒结合的亲和性 | 第48页 |
| 2.3.19 HCV受体转基因小鼠攻毒验证单抗的中和保护作用 | 第48-49页 |
| 2.3.20 统计分析 | 第49页 |
| 2.4 实验结果 | 第49-69页 |
| 2.4.1 PCR定点突变获得sE2的糖基化突变体sE2Nx | 第49-50页 |
| 2.4.2 DNA疫苗能够在体内外有效表达 | 第50-51页 |
| 2.4.3 sE2-His蛋白的原核表达以及纯化 | 第51-52页 |
| 2.4.4 糖基化缺失突变体组能刺激脾细胞中更强的IFN-γ及IL-4的释放 | 第52-54页 |
| 2.4.5 sE2N1以及sE2N2的体内外特异性CTL活性最高 | 第54-56页 |
| 2.4.6 E2的N2糖基化缺失后对抗原递呈的影响 | 第56-58页 |
| 2.4.7 免疫小鼠血清中抗体效价测定 | 第58-59页 |
| 2.4.8 sE2N2组免疫小鼠的抗血清有效中和HCVcc | 第59-60页 |
| 2.4.9 利用sE2N2免疫后小鼠筛选针对HCV的中和性单抗 | 第60-63页 |
| 2.4.10 靶向B细胞的HCV疫苗的研究 | 第63-69页 |
| 2.5 讨论 | 第69-73页 |
| 第三章 HCV core G4链体结构的鉴定及靶向G4结构的抗病毒策略研究 | 第73-98页 |
| 3.1 实验材料 | 第73-74页 |
| 3.2 主要仪器 | 第74页 |
| 3.3 实验方法 | 第74-83页 |
| 3.3.1 生物信息学分析 | 第74-75页 |
| 3.3.2 核磁共振分析 | 第75页 |
| 3.3.3 克隆构建 | 第75-78页 |
| 3.3.4 HCVcc病毒包装 | 第78-79页 |
| 3.3.5 HCV扩增、浓缩、纯化以及滴度测定 | 第79页 |
| 3.3.6 PDP和TMPyP4药物对富G序列下游蛋白及CORE蛋白的抑制 | 第79页 |
| 3.3.7 PDP和TMPyP4药物的抗病毒活性 | 第79-81页 |
| 3.3.8 Pull-down检测Biotin-PDP对HCV上富G序列的富集 | 第81页 |
| 3.3.9 免疫荧光及共聚焦显微镜观察Biotin-PDP与HCV上富G序列的共定位情况 | 第81-82页 |
| 3.3.10 统计分析 | 第82-83页 |
| 3.4 实验结果 | 第83-95页 |
| 3.4.1 序列分析HCV基因组中保守的富G序列 | 第83-84页 |
| 3.4.2 ~1H核磁共振检测1a和1b富G序列 | 第84-85页 |
| 3.4.3 HCV富G序列在胞内可形成G4结构,该结构可被G4配体结合 | 第85-87页 |
| 3.4.4 HCV基因组RNA可形成G4结构,该结构可被G4配体结合 | 第87-88页 |
| 3.4.5 G4稳定剂对HCV G4 RNA被稳定后蛋白表达影响 | 第88-89页 |
| 3.4.6 G4稳定剂对HCV CORE蛋白及其对应的G4突变体的表达影响 | 第89-90页 |
| 3.4.7 G4稳定剂的抗病毒活性 | 第90-93页 |
| 3.4.8 HCV基因组中富G序列突变后抑制了G4配体的相互作用 | 第93-95页 |
| 3.5 讨论 | 第95-98页 |
| 参考文献 | 第98-108页 |
| 综述 | 第108-123页 |
| 综述部分参考文献 | 第118-123页 |
| 附录 | 第123-125页 |
| 攻读博士学位期间已发表的科研成果 | 第125-126页 |
| 后记 | 第126-127页 |
