| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略表语 | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-26页 |
| 1 伪狂犬病毒 | 第12-15页 |
| 1.1 伪狂犬病 | 第12页 |
| 1.2 伪狂犬病毒 | 第12-14页 |
| 1.3 IE180基因 | 第14-15页 |
| 2 G-四链体 | 第15-18页 |
| 2.1 G-四链体结构 | 第15-17页 |
| 2.2 G-四链体的生物学意义 | 第17-18页 |
| 3 G-四链体及配体在病毒中的研究 | 第18-22页 |
| 3.1 HIV基因组中G-四链体和TmPyP4 | 第18-19页 |
| 3.2 EBV中EBNA1基因mRNAG-四链体和PDS | 第19-21页 |
| 3.3 HSV-1基因组中G-四链体和BRACO-19 | 第21-22页 |
| 4 G-四链体在3’端非翻译区中的功能 | 第22-24页 |
| 4.1 调控mRNA稳定性 | 第22-23页 |
| 4.2 调控mRNA的亚细胞定位 | 第23页 |
| 4.3 调控翻译过程 | 第23-24页 |
| 5 论文设计思想 | 第24-26页 |
| 第二章 IE180基因3’UTR的G-四链体可形成序列的结构与功能分析 | 第26-60页 |
| 1 前言 | 第26-28页 |
| 2 试剂与仪器 | 第28-30页 |
| 2.1 化学药品与生物试剂 | 第28-30页 |
| 2.2 仪器 | 第30页 |
| 3 材料与方法 | 第30-43页 |
| 3.1 3 ’RACE法克隆PRVEa毒株IE180基因3’UTR | 第30-35页 |
| 3.1.1 从感染病毒的细胞样品中提取总RNA | 第30-31页 |
| 3.1.2 3 ’末端快速扩增技术 | 第31-33页 |
| 3.1.3 目的片段克隆 | 第33-35页 |
| 3.2 不同伪狂犬病毒毒株IE180基因3’UTR序列收集与保守性分析 | 第35-36页 |
| 3.3 G-四链体可形成序列预测软件分析IE180基因3’UTR富G序列 | 第36页 |
| 3.4 圆二色光谱分析核酸形成的结构 | 第36-37页 |
| 3.5 构建含有野生型与突变型3’UTR双荧光素酶报告载体 | 第37-40页 |
| 3.5.1 克隆野生型3’UTR双荧光素酶报告质粒 | 第37-39页 |
| 3.5.2 同源重组法构建突变型3’UTR双荧光素酶报告质粒 | 第39-40页 |
| 3.6 实时荧光定量PCR检测G-四链体形成对转录的影响 | 第40-42页 |
| 3.6.1 质粒转染 | 第40-41页 |
| 3.6.2 提取细胞总RNA | 第41页 |
| 3.6.3 模板cDNA制备 | 第41页 |
| 3.6.4 实时荧光定量PCR | 第41-42页 |
| 3.7 双荧光素酶报告系统检测G-四链体形成对翻译的影响 | 第42页 |
| 3.7.1 质粒转染 | 第42页 |
| 3.7.2 双荧光素酶检测 | 第42页 |
| 3.8 数据统计分析 | 第42-43页 |
| 4 结果与分析 | 第43-58页 |
| 4.1 PRVEa毒株IE180基因3’UTR序列克隆 | 第43页 |
| 4.2 IE180基因3’UTRG-四链体可形成序列鉴定及结构分析 | 第43-50页 |
| 4.2.1 IE180基因3’UTR富G序列分析 | 第43-44页 |
| 4.2.2 富G序列157-170分析 | 第44-45页 |
| 4.2.2.1 富G序列157-170保守性分析 | 第44-45页 |
| 4.2.2.2 富G序列157-170结构分析 | 第45页 |
| 4.2.3 富G序列256-366分析 | 第45-50页 |
| 4.2.3.1 富G序列256-366保守性分析 | 第45-46页 |
| 4.2.3.2 富G序列256-366结构分析 | 第46-47页 |
| 4.2.3.3 G-四链体可形成序列PQS3与PQS18保守性分析 | 第47-48页 |
| 4.2.3.4 G-四链体可形成序列PQS3与PQS18结构分析 | 第48-50页 |
| 4.3 IE180基因3’UTR的G-四链体可形成序列对转录和翻译的影响 | 第50-58页 |
| 4.3.1 野生型与突变型3’UTR双荧光素酶报告载体构建 | 第50-51页 |
| 4.3.2 富G序列157-170对转录和翻译的影响 | 第51-52页 |
| 4.3.2.1 富G序列157-170对转录的影响 | 第51页 |
| 4.3.2.2 富G序列157-170对翻译的影响 | 第51-52页 |
| 4.3.3 富G序列256-366对转录和翻译的影响 | 第52-58页 |
| 4.3.3.1 富G序列256-366对转录的影响 | 第52-53页 |
| 4.3.3.2 富G序列256-366对翻译的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.3.3 G-四链体可形成序列PQS3对转录和翻译的影响 | 第54-56页 |
| 4.3.3.4 G-四链体可形成序列PQS18对转录和翻译的影响 | 第56-58页 |
| 5 结论 | 第58-60页 |
| 第三章 G-四链体配体小分子TmPyP4抗伪狂犬病毒研究 | 第60-72页 |
| 1 前言 | 第60-61页 |
| 2 试剂与仪器 | 第61-62页 |
| 2.1 化学药品与生物试剂 | 第61-62页 |
| 2.2 仪器 | 第62页 |
| 3 材料与方法 | 第62-65页 |
| 3.1 紫外-可见吸收光谱分析TmPyP4与PQS18相互作用 | 第62页 |
| 3.2 G-四链体配体小分子TmPyP4对293T细胞毒性分析实验 | 第62-63页 |
| 3.3 双荧光素酶报告系统检测TmPyP4对转录和翻译的影响 | 第63页 |
| 3.4 G-四链体配体小分子TmPyP4对PK15细胞毒性分析实验 | 第63-64页 |
| 3.5 TmPyP4抗病毒实验 | 第64-65页 |
| 3.5.1 TmPyP4与病毒的直接相互作用 | 第64页 |
| 3.5.2 TmPyP4作用于病毒增殖过程 | 第64-65页 |
| 4 结果与分析 | 第65-70页 |
| 4.1 TmPyP4稳定PQS18G-四链体结构 | 第65-66页 |
| 4.2 TmPyP4对报告基因转录与翻译的影响 | 第66-68页 |
| 4.2.1 TmPyP4对293T细胞最大适用浓度 | 第66页 |
| 4.2.2 TmPyP4对报告基因转录和翻译影响 | 第66-68页 |
| 4.3 TmPyP4抗伪狂犬病毒分析 | 第68-70页 |
| 4.3.1 TmPyP4对PK15细胞最大适用浓度的检测 | 第68页 |
| 4.3.2 TmPyP4对PRV的灭活作用 | 第68-69页 |
| 4.3.3 TmPyP4对PRV增殖过程的影响 | 第69-70页 |
| 5 结论 | 第70-72页 |
| 第四章 总结与展望 | 第72-73页 |
| 1 结论 | 第72页 |
| 2 展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-84页 |
| 附录 | 第84-92页 |
| S1 引物表 | 第84-85页 |
| S2 载体 | 第85-86页 |
| S3 不同伪狂犬病毒毒株IE180基因3’UTR序列比对结果 | 第86-91页 |
| S4 突变型3’UTR双荧光素酶报告载体 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
