| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-49页 |
| 1 小麦矮缩病毒的研究进展 | 第17-25页 |
| 1.1 寄主范围与侵染症状 | 第18-19页 |
| 1.2 发生与分布 | 第19页 |
| 1.3 传播介体 | 第19-21页 |
| 1.4 发病规律 | 第21页 |
| 1.5 病毒粒子形态和株系划分 | 第21-22页 |
| 1.6 病毒的分子生物学特征 | 第22-23页 |
| 1.7 小麦矮缩病毒检测技术 | 第23-25页 |
| 1.7.1 生物学检测方法 | 第23页 |
| 1.7.2 电子显微镜检测方法 | 第23页 |
| 1.7.3 分子生物学检测方法 | 第23-24页 |
| 1.7.4 血清学检测方法 | 第24-25页 |
| 1.8 防治措施 | 第25页 |
| 1.8.1 选育推广抗病品种 | 第25页 |
| 1.8.2 农业与生态防治 | 第25页 |
| 1.8.3 物理与化学防治 | 第25页 |
| 2 大麦黄矮病毒的研究进展 | 第25-37页 |
| 2.1 症状特点、寄主范围及传播方式 | 第26-27页 |
| 2.2 病毒分类地位与株系划分 | 第27-29页 |
| 2.3 病毒粒子形态和生化特性 | 第29页 |
| 2.4 发生与分布 | 第29-31页 |
| 2.5 基因组结构与功能 | 第31-33页 |
| 2.6 传播介体 | 第33-34页 |
| 2.7 大麦黄矮病毒的检测方法 | 第34-36页 |
| 2.7.1 生物学检测方法 | 第34-35页 |
| 2.7.2 电镜检测方法 | 第35页 |
| 2.7.3 分子生物学检测方法 | 第35页 |
| 2.7.4 血清学检测方法 | 第35-36页 |
| 2.8 防治措施 | 第36-37页 |
| 2.8.1 筛选、培育和鉴定抗病品种 | 第36页 |
| 2.8.2 农业防治 | 第36-37页 |
| 2.8.3 化学防治 | 第37页 |
| 3 单克隆抗体技术及其在植物病毒学中的应用 | 第37-47页 |
| 3.1 抗体的结构及特性 | 第38-39页 |
| 3.2 单克隆抗体技术 | 第39-41页 |
| 3.2.1 杂交瘤技术基本原理 | 第39-40页 |
| 3.2.2 杂交瘤技术基本流程 | 第40-41页 |
| 3.3 单克隆抗体在植物病毒学中的应用 | 第41-47页 |
| 3.3.1 病毒病害的诊断与监测 | 第41-46页 |
| 3.3.2 病毒株系鉴定及分离物分型 | 第46页 |
| 3.3.3 病毒蛋白抗原表位分析 | 第46-47页 |
| 3.3.4 其他应用 | 第47页 |
| 4 研究目的和意义 | 第47-49页 |
| 第二章 小麦矮缩病毒单克隆抗体的制备及其应用 | 第49-75页 |
| 1 材料与方法 | 第49-64页 |
| 1.1 病毒材料、菌株和质粒 | 第49页 |
| 1.2 培养基、抗体及实验材料 | 第49-50页 |
| 1.3 WDV CP的原核表达 | 第50-55页 |
| 1.3.1 CTAB法提取感染WDV小麦植物的总DNA | 第50-51页 |
| 1.3.2 WDV CP基因的扩增 | 第51-52页 |
| 1.3.3 PCR产物的纯化 | 第52-53页 |
| 1.3.4 PCR产物与T载体连接 | 第53页 |
| 1.3.5 热击法转化和重组子筛选 | 第53-54页 |
| 1.3.6 重组质粒的提取 | 第54页 |
| 1.3.7 pET-32a-CP重组载体的构建及转化 | 第54-55页 |
| 1.4 WDV CP蛋白的表达及纯化 | 第55-58页 |
| 1.4.1 WDV CP的诱导表达 | 第55页 |
| 1.4.2 重组蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| 1.4.3 蛋白的透析及复性 | 第56页 |
| 1.4.4 SDS-PAGE和Western blot | 第56-58页 |
| 1.5 单克隆抗体的制备 | 第58-62页 |
| 1.5.1 纯化蛋白免疫小鼠 | 第58-59页 |
| 1.5.2 细胞融合及培养 | 第59页 |
| 1.5.3 杂交瘤细胞的单克隆化及扩增 | 第59-60页 |
| 1.5.4 杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第60页 |
| 1.5.5 腹水抗体的制备及纯化 | 第60-61页 |
| 1.5.6 腹水抗体效价的测定 | 第61页 |
| 1.5.7 单克隆抗体类型及亚类鉴定 | 第61-62页 |
| 1.6 血清学方法的建立及特性分析 | 第62-64页 |
| 1.6.1 ACP-ELISA方法的建立及其特异性和灵敏度分析 | 第62-63页 |
| 1.6.2 dot-ELISA方法的建立及其特异性和灵敏度分析 | 第63-64页 |
| 1.7 血清学方法的田间应用 | 第64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-73页 |
| 2.1 WDV CP的原核表达和纯化 | 第64-66页 |
| 2.2 细胞的融合、筛选和克隆 | 第66页 |
| 2.3 腹水抗体制备、效价测定及抗体亚类鉴定 | 第66-67页 |
| 2.4 Western blot分析WDV单抗的特异性 | 第67-68页 |
| 2.5 ACP-ELISA方法的建立及其特性分析 | 第68-69页 |
| 2.5.1 检测植物中WDV的ACP-ELISA方法的建立 | 第68页 |
| 2.5.2 ACP-ELISA方法和WDV单抗的特异性分析 | 第68-69页 |
| 2.5.3 ACP-ELISA方法和WDV单抗的灵敏度分析 | 第69页 |
| 2.6 dot-ELISA方法的建立及其特性分析 | 第69-71页 |
| 2.6.1 检测植物中WDV的dot-ELISA方法的建立 | 第69-70页 |
| 2.6.2 dot-ELISA方法和WDV单抗的的特异性分析 | 第70-71页 |
| 2.6.3 dot-ELISA方法和WDV单抗的的灵敏度分析 | 第71页 |
| 2.7 血清学方法的田间应用 | 第71-73页 |
| 3 讨论 | 第73-75页 |
| 第三章 大麦黄矮病毒PA株系单克隆抗体的制备及其应用 | 第75-89页 |
| 1 材料与方法 | 第75-79页 |
| 1.1 病毒材料 | 第75页 |
| 1.2 培养基、抗体及实验材料 | 第75-76页 |
| 1.3 免疫原的制备 | 第76页 |
| 1.4 单克隆抗体的制备 | 第76页 |
| 1.5 Western blot分析单抗的特性 | 第76页 |
| 1.6 血清学方法的建立及特性分析 | 第76-77页 |
| 1.6.1 ACP-ELISA方法的建立及其特异性和灵敏度分析 | 第76-77页 |
| 1.6.2 dot-ELISA方法的建立及其特异性和灵敏度分析 | 第77页 |
| 1.7 RT-PCR方法检测BYDV PAV | 第77-79页 |
| 1.7.1 TRIzol法提取总RNA的方法 | 第77-78页 |
| 1.7.2 RT-PCR反应 | 第78-79页 |
| 1.8 血清学方法的田间应用 | 第79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-87页 |
| 2.1 细胞的融合、杂交瘤的筛选和克隆 | 第79-80页 |
| 2.2 腹水抗体制备、效价测定及抗体亚类鉴定 | 第80页 |
| 2.3 Western blot分析BYDV PAV单抗的特异性 | 第80-81页 |
| 2.4 ACP-ELISA方法的建立 | 第81-83页 |
| 2.4.1 检测植物中BYDV PAV的ACP-ELISA方法的建立 | 第81页 |
| 2.4.2 ACP-ELISA方法和BYDV PAV单抗的特异性分析 | 第81-82页 |
| 2.4.3 ACP-ELISA方法和BYDV PAV单抗的灵敏度分析 | 第82-83页 |
| 2.5 dot-ELISA方法的建立及其特异性和灵敏度分析 | 第83-85页 |
| 2.5.1 检测植物中BYDV PAV的dot-ELISA方法的建立 | 第83-84页 |
| 2.5.2 dot-ELISA方法和BYDV PAV单抗的特异性分析 | 第84-85页 |
| 2.5.3 dot-ELISA方法和BYDV PAV单抗的灵敏度分析 | 第85页 |
| 2.6 血清学方法的田间应用 | 第85-87页 |
| 3 讨论 | 第87-89页 |
| 全文总结 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-107页 |
| 附录A 本论文中所用病毒缩写及中英文对照 | 第107-109页 |
| 附录B 常用生化及分子生物学试剂与仪器 | 第109-110页 |
| 附录C 常用缓冲液及培养基配方 | 第110-114页 |
