| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 犬新孢子虫病概述 | 第11-12页 |
| 1.2 犬新孢子虫对宿主细胞的入侵 | 第12-13页 |
| 1.3 犬新孢子虫入侵相关蛋白生物学研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3.1 微线体蛋白 | 第13页 |
| 1.3.2 棒状体蛋白 | 第13-14页 |
| 1.3.3 致密颗粒蛋白 | 第14页 |
| 1.3.4 表面蛋白 | 第14-15页 |
| 1.4 新孢子虫在宿主机体内引起的免疫应答 | 第15页 |
| 1.5 犬新孢子虫诊断方法及相关抗原研究进展概述 | 第15-17页 |
| 1.5.1 根据临床症状和流行规律诊断 | 第15页 |
| 1.5.2 病理组织学诊断 | 第15-16页 |
| 1.5.3 血清学诊断 | 第16-17页 |
| 1.5.4 分子生物学诊断 | 第17页 |
| 1.6 噬菌体展示技术的原理及应用 | 第17-18页 |
| 1.7 研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料 | 第19-22页 |
| 2.1 虫株及实验动物 | 第19页 |
| 2.1.1 虫株 | 第19页 |
| 2.1.2 菌种与质粒 | 第19页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第19页 |
| 2.2 试验所用试剂与仪器 | 第19-22页 |
| 2.2.1 主要实验试剂 | 第19-20页 |
| 2.2.2 实验相关主要溶液配制 | 第20-21页 |
| 2.2.3 主要实验仪器与设备 | 第21页 |
| 2.2.4 主要的生物学软件 | 第21-22页 |
| 3 方法 | 第22-32页 |
| 3.1 新孢子虫的体外培养 | 第22页 |
| 3.2 新孢子虫的速殖子的纯化 | 第22页 |
| 3.3 新孢子虫速殖子总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 3.4 新孢子虫速殖子mRNA的提取 | 第23页 |
| 3.5 cDNA的合成 | 第23-26页 |
| 3.5.1 cDNA的第一条链合成 | 第23-24页 |
| 3.5.2 cDNA的第二条链合成 | 第24页 |
| 3.5.3 双链cDNA的末端平端化 | 第24-25页 |
| 3.5.4 与EcoRI/HindⅢ接头相连 | 第25页 |
| 3.5.5 产物的EcoRI和HindⅢ消化 | 第25页 |
| 3.5.6 cDNA产物的分级分离 | 第25-26页 |
| 3.6 cDNA片段与载体臂相连接 | 第26页 |
| 3.7 噬菌体的体外包装 | 第26页 |
| 3.8 文库滴度的测定 | 第26页 |
| 3.9 文库中插入基因片段情况的鉴定 | 第26-27页 |
| 3.10 文库的扩增 | 第27页 |
| 3.11 Nc-1免疫小鼠和感染小鼠的血清制备及IgG的纯化 | 第27页 |
| 3.12 文库的筛选 | 第27-28页 |
| 3.13 筛选克隆的鉴定和分析 | 第28页 |
| 3.14 犬新孢子虫速殖子基因组提取 | 第28页 |
| 3.15 NcSAG1、NcSRS2基因的克隆及原核表达 | 第28-31页 |
| 3.15.1 引物的设计及克隆 | 第28-29页 |
| 3.15.2 重组质粒pMD18T-NcSRS2的构建 | 第29-30页 |
| 3.15.3 重组质粒pColdⅢ-NcSRS2的构建 | 第30页 |
| 3.15.4 NcSAG1、NeSRS2蛋白的表达纯化 | 第30-31页 |
| 3.16 NcSAG1、NcSRS2重组蛋白的抗原性鉴定 | 第31-32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-38页 |
| 4.1 新孢子虫总RNA及mRNA的提取 | 第32页 |
| 4.2 新孢子虫文库滴度的测定 | 第32-33页 |
| 4.3 文库中插入基因片段情况的鉴定 | 第33页 |
| 4.4 Nc-1免疫小鼠和感染小鼠的血清制备及IgG的纯化 | 第33-34页 |
| 4.5 新孢子虫噬菌体文库的筛选结果 | 第34-35页 |
| 4.6 NcSAG1、NcSRS2重组蛋白的表达及抗原性鉴定 | 第35-38页 |
| 5 讨论 | 第38-40页 |
| 6 结论 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-49页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第49页 |
