| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 植物花发育的分子机制及其研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1.1 植物花器官形态建成 | 第13页 |
| 1.1.2 植物花器官形态建成的分子机制 | 第13-17页 |
| 1.2 基因可变剪接的发现 | 第17-20页 |
| 1.2.1 mRNA 剪接的分子机制 | 第17-18页 |
| 1.2.2 可变剪接的定义和基本模式 | 第18-19页 |
| 1.2.3 当前研究现状 | 第19-20页 |
| 1.3 星花木兰研究现状 | 第20-22页 |
| 1.4 本研究的目的、意义及技术路线 | 第22-23页 |
| 2 星花木兰 AGAMOUS 同源基因的克隆与可变剪接分析 | 第23-47页 |
| 2.1 星花木兰 AGAMOUS 同源基因 cDNA 序列克隆 | 第23-28页 |
| 2.1.1 主要实验试剂及仪器 | 第23页 |
| 2.1.1.1 主要实验试剂 | 第23页 |
| 2.1.1.2 主要实验仪器 | 第23页 |
| 2.1.2 材料与方法 | 第23-28页 |
| 2.1.2.1 星花木兰材料的收集 | 第23-24页 |
| 2.1.2.2 星花木兰花芽总 RNA 的提取 | 第24页 |
| 2.1.2.3 总 RNA 中 DNA 的清除 | 第24-25页 |
| 2.1.2.4 星花木兰第一链 cDNA 的合成 | 第25页 |
| 2.1.2.5 星花木兰 AGAMOUS 同源基因的克隆 | 第25-28页 |
| 2.2 星花木兰 AGAMOUS 同源基因 DNA 序列的克隆 | 第28-30页 |
| 2.2.1 星花木兰基因组 DNA 的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.2 星花木兰 AGAMOUS 同源基因基因组 DNA 的克隆 | 第29-30页 |
| 2.3 星花木兰 AGAMOUS 同源基因拷贝数检测 | 第30-35页 |
| 2.3.1 主要试剂的配制 | 第30-31页 |
| 2.3.2 探针的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.3 星花木兰基因组 DNA 的获得 | 第32页 |
| 2.3.4 星花木兰基因组 DNA 的酶切、电泳 | 第32-33页 |
| 2.3.5 转膜用的凝胶预处理 | 第33-34页 |
| 2.3.6 Southern 印迹转膜 | 第34页 |
| 2.3.7 Southern 杂交 | 第34-35页 |
| 2.3.8 洗膜 | 第35页 |
| 2.3.9 杂交结果检测 | 第35页 |
| 2.4 星花木兰 AGAMOUS 同源基因拼接形式的鉴定 | 第35页 |
| 2.5 星花木兰 AGAMOUS 同源基因不同剪接转录本分析 | 第35-36页 |
| 2.5.1 不同剪接转录本生物信息学分析 | 第35页 |
| 2.5.2 不同剪接转录本蛋白序列比对与结构域分析 | 第35页 |
| 2.5.3 星花木兰 AGAMOUS 同源基因系统进化分析 | 第35-36页 |
| 2.6 结果分析 | 第36-45页 |
| 2.6.1 星花木兰 Total RNA 质量检测 | 第36-37页 |
| 2.6.2 星花木兰 AGAMOUS 同源基因的克隆 | 第37页 |
| 2.6.3 星花木兰 AGAMOUS 同源基因基因组 DNA 序列的克隆 | 第37-40页 |
| 2.6.4 星花木兰 AGAMOUS 同源基因拷贝数检测 | 第40-41页 |
| 2.6.5 星花木兰 AGAMOUS 同源基因的 cDNA 序列分析 | 第41-42页 |
| 2.6.6 星花木兰 AGAMOUS 同源基因一级结构分析 | 第42-43页 |
| 2.6.7 星花木兰 AGAMOUS 同源基因蛋白质亚细胞定位分析 | 第43页 |
| 2.6.8 星花木兰 AGAMOUS 同源基因结构域分析 | 第43-44页 |
| 2.6.9 星花木兰 AGAMOUS 同源基因分子系统发生分析 | 第44-45页 |
| 2.7 讨论 | 第45-47页 |
| 2.7.1 星花木兰 AGAMOUS 同源基因 3 种剪接转录本结构分析 | 第45-47页 |
| 3 星花木兰 AGAMOUS 同源基因的表达样式分析 | 第47-55页 |
| 3.1 不同组织 3 种剪接体的表达特异性分析 | 第47-49页 |
| 3.1.1 半定量模板的获得 | 第47页 |
| 3.1.2 星花木兰内参基因的克隆 | 第47-48页 |
| 3.1.3 半定量引物的选取 | 第48页 |
| 3.1.4 半定量检测 | 第48-49页 |
| 3.2 不同时期 3 种剪接体的实时荧光定量分析 | 第49-50页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第49页 |
| 3.2.2 不同时期总 RNA 的提取 | 第49页 |
| 3.2.3 实时荧光定量引物设计 | 第49页 |
| 3.2.4 不同发育阶段 3 剪接转录本实时荧光定量分析 | 第49-50页 |
| 3.3 结果与分析 | 第50-53页 |
| 3.3.1 星花木兰 ACTIN 基因克隆 | 第50-51页 |
| 3.3.2 星花木兰 3 种剪接体基因组织表达特异性分析 | 第51页 |
| 3.3.3 不同发育阶段剪接转录本表达模式 | 第51-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-55页 |
| 3.4.1 星花木兰 AGAMOUS 同源基因组织表达特性分析 | 第53-54页 |
| 3.4.2 星花木兰不同发育阶段 AGAMOUS 同源基因表达特性分析 | 第54-55页 |
| 4 星花木兰 AGAMOUS 同源同源基因功能分析 | 第55-77页 |
| 4.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.1.1 转基因植物材料 | 第55页 |
| 4.1.2 载体和菌种 | 第55页 |
| 4.1.3 培养基与抗生素 | 第55-56页 |
| 4.1.4 主要试剂的配制 | 第56页 |
| 4.2 转基因过表达载体的构建 | 第56-59页 |
| 4.2.1 目的基因和载体质粒的获得 | 第56-57页 |
| 4.2.2 目的基因和载体质粒酶切 | 第57页 |
| 4.2.3 目的基因与载体连接 | 第57页 |
| 4.2.4 连接物的转化 | 第57页 |
| 4.2.5 重组子的鉴定 | 第57-58页 |
| 4.2.6 重组子导入农杆菌感受态细胞 | 第58-59页 |
| 4.3 拟南芥基因型的鉴定 | 第59-61页 |
| 4.3.1 拟南芥基因组 DNA 的微量提取 | 第59-60页 |
| 4.3.2 拟南芥 DNA 中 RNA 的去除 | 第60页 |
| 4.3.3 拟南芥 AGAMOUS 基因型鉴定特异 DNA 片段扩增 | 第60-61页 |
| 4.4 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第61-63页 |
| 4.4.1 转基因用拟南芥的培养 | 第61-62页 |
| 4.4.2 农杆菌的扩大培养 | 第62页 |
| 4.4.3 拟南芥的转化 | 第62页 |
| 4.4.4 转基因拟南芥的筛选 | 第62-63页 |
| 4.5 转基因拟南芥阳性植株的鉴定 | 第63-65页 |
| 4.5.1 转基因拟南芥的 PCR 鉴定 | 第63-64页 |
| 4.5.2 转基因拟南芥的基因型鉴定 | 第64页 |
| 4.5.3 转基因拟南芥的 qRT-PCR 检测 | 第64-65页 |
| 4.6 转基因拟南芥的表型分析 | 第65页 |
| 4.7 结果分析 | 第65-74页 |
| 4.7.1 目的基因过表达载体的构建 | 第65-67页 |
| 4.7.2 目的基因农杆菌转化检测 | 第67页 |
| 4.7.3 基因转化前拟南芥 AG 基因基因型的鉴定 | 第67-68页 |
| 4.7.4 转基因拟南芥的筛选 | 第68页 |
| 4.7.5 转基因拟南芥的鉴定 | 第68-69页 |
| 4.7.6 星花木兰 AGAMOUS 同源基因功能分析 | 第69-74页 |
| 4.8 讨论 | 第74-77页 |
| 4.8.1 星花木兰 mastag2 同源基因功能分析 | 第74页 |
| 4.8.2 星花木兰 mastag3 同源基因功能分析 | 第74-75页 |
| 4.8.3 星花木兰 MastAG 同源基因功能分析 | 第75-76页 |
| 4.8.4 星花木兰 AGAMOUS 同源基因不同剪接转录本在花发育中的功能分析 | 第76-77页 |
| 5 结论与展望 | 第77-79页 |
| 5.1 结论 | 第77-78页 |
| 5.2 展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 附录：攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第89页 |
