| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 1 前言 | 第10-15页 |
| 1.1 EIAV生物学特征 | 第11-12页 |
| 1.1.1 EIAV形态结构 | 第11页 |
| 1.1.2 EIAV基因组结构 | 第11-12页 |
| 1.1.3 EIAV的细胞嗜性和在感染动物体内的组织分布 | 第12页 |
| 1.2 马传染性贫血的致病性 | 第12-13页 |
| 1.3 microRNA概述 | 第13-14页 |
| 1.3.1 microRNA与病毒 | 第13页 |
| 1.3.2 miRNA生成过程和作用机制 | 第13-14页 |
| 1.3.3 miRNA检测 | 第14页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第14-15页 |
| 2 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.1 试验动物 | 第15页 |
| 2.2 病毒株和细胞 | 第15页 |
| 2.3 主要试剂和质粒 | 第15页 |
| 2.4 主要仪器 | 第15页 |
| 2.5 主要溶液配置 | 第15-17页 |
| 3 试验方法 | 第17-29页 |
| 3.1 eMDM的培养及病毒感染 | 第17页 |
| 3.2 293T细胞的培养 | 第17页 |
| 3.3 RNA的提取 | 第17-18页 |
| 3.3.1 病毒RNA的提取 | 第17页 |
| 3.3.2 病毒生长曲线的建立 | 第17-18页 |
| 3.4 间接免疫荧光检测细胞感染率 | 第18页 |
| 3.5 EIAVDLV34感染eMDM的miRNA表达谱的测定 | 第18-19页 |
| 3.5.1 细胞RNA的提取 | 第18-19页 |
| 3.5.2 小RNA文库构建及高通量测序 | 第19页 |
| 3.6 荧光定量PCR验证高通量测序结果 | 第19页 |
| 3.7 差异表达microRNA的生物信息学分析 | 第19页 |
| 3.8 eMDM中高表达miR-92a对EIAV复制的影响 | 第19-20页 |
| 3.9 EIAV反转录酶活性的检测 | 第20页 |
| 3.10 293T细胞中高表达和miR-92a对EIAV-luc表达的影响 | 第20-21页 |
| 3.11 miRNA激活宿主炎症反应试验 | 第21-22页 |
| 3.12 荧光素酶报告系统验证miRNA的靶位点 | 第22-23页 |
| 3.12.1 miRNA与EIAV基因组互作验证 | 第22页 |
| 3.12.2 miRNA与宿主基因互作验证 | 第22-23页 |
| 3.13 miRNA靶基因的mRNA水平检测 | 第23-24页 |
| 3.14 EIAVDLV34感染eMDM后miRNA靶基因mRNA水平检测 | 第24页 |
| 3.15 miRNA靶基因的克隆 | 第24-26页 |
| 3.15.1 质粒的转化 | 第24-25页 |
| 3.15.2 摇菌 | 第25页 |
| 3.15.3 菌液PCR鉴定 | 第25页 |
| 3.15.4 核酸凝胶电泳检测目的条带的扩增观察 | 第25页 |
| 3.15.5 阳性克隆的测序及序列比对 | 第25-26页 |
| 3.15.6 质粒的提取 | 第26页 |
| 3.16 WesternBlot检测靶基因的表达 | 第26-27页 |
| 3.16.1 293T细胞的培养及转染 | 第26-27页 |
| 3.16.2 WesternBlot检测蛋白表达 | 第27页 |
| 3.17 miRNA靶基因过表达及再感染试验 | 第27页 |
| 3.18 靶基因CD69的KnockDown试验及病毒再感染试验 | 第27-29页 |
| 4 结果 | 第29-42页 |
| 4.1 病毒生长曲线 | 第29页 |
| 4.2 细胞感染率 | 第29-30页 |
| 4.3 microRNA差异表达谱 | 第30页 |
| 4.4 荧光定量PCR验证差异表达的miRNA结果 | 第30-31页 |
| 4.5 差异表达miRNA的生物信息学功能预测结果 | 第31-33页 |
| 4.6 高表达miR-92a对EIAV复制影响结果 | 第33-34页 |
| 4.7 EIAV反转录酶活性检测结果 | 第34-35页 |
| 4.8 293T细胞中高表达miR-92a对EIAV-luc表达的影响 | 第35页 |
| 4.9 宿主细胞炎症反应激活结果 | 第35-36页 |
| 4.10 荧光素酶报告系统验证结果 | 第36-38页 |
| 4.10.1 miRNA和EIAV基因组互作验证结果 | 第36-37页 |
| 4.10.2 miRNA与宿主互作验证结果 | 第37-38页 |
| 4.11 miR-92a靶基因CD69的mRNA水平检测结果 | 第38-39页 |
| 4.12 EIAVDLV34感染eMDM后靶基因CD69mRNA水平检测结果 | 第39页 |
| 4.13 靶基因CD69的克隆及表达结果 | 第39-40页 |
| 4.14 CD69过表达及再感染试验结果 | 第40页 |
| 4.15 靶基因CD69的KnockDown试验及病毒再感染试验 | 第40-42页 |
| 4.15.1 siRNA筛选及干扰效果 | 第40-41页 |
| 4.15.2 CD69进行KnockDown试验后的病毒再感染试验 | 第41-42页 |
| 5 讨论 | 第42-45页 |
| 6 结论 | 第45-46页 |
| 7 展望 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 作者简介 | 第52页 |
