| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 1 引言 | 第9-14页 |
| 1.1 古菌 | 第9-10页 |
| 1.1.1 发现及分类 | 第9-10页 |
| 1.1.2 研究进展及其展望 | 第10页 |
| 1.2 嗜盐古菌 | 第10页 |
| 1.3 嗜盐菌嗜盐机理 | 第10-12页 |
| 1.3.1 嗜盐菌细胞结构的稳定要依靠高盐环境 | 第11页 |
| 1.3.2 细胞内离子浓度的维持要依靠高盐环境 | 第11页 |
| 1.3.3 嗜盐菌酶的产生、稳定性以及活性发挥要依靠高盐环境 | 第11-12页 |
| 1.3.4 嗜盐菌通过在自身细胞内产生或积累相容性溶质适应高盐环境 | 第12页 |
| 1.4 蛋白酶 | 第12-13页 |
| 1.4.1 丝氨酸蛋白酶 | 第13页 |
| 1.4.2 金属蛋白酶 | 第13页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第13-14页 |
| 2 实验材料与方法 | 第14-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-17页 |
| 2.1.1 菌株 | 第14页 |
| 2.1.2 感受态细胞 | 第14页 |
| 2.1.3 质粒 | 第14-15页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第15页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第15-16页 |
| 2.1.6 培养基 | 第16-17页 |
| 2.1.7 实验所需溶液配制 | 第17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-24页 |
| 2.2.1 嗜盐古菌基因组DNA的提取 | 第17页 |
| 2.2.2 基因组DNA的检测 | 第17页 |
| 2.2.3 嗜盐古菌中3种蛋白酶基因的引物设计 | 第17-18页 |
| 2.2.4 目的基因的PCR扩增 | 第18-19页 |
| 2.2.5 目的DNA条带的回收 | 第19页 |
| 2.2.6 目的片段的连接 | 第19-20页 |
| 2.2.7 重组克隆质粒的转化 | 第20页 |
| 2.2.8 阳性克隆的筛选 | 第20页 |
| 2.2.9 重组克隆质粒的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.10 嗜盐古菌Natrinema-IM-1蛋白酶原核表达载体的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.11 嗜盐古菌Natrinema-IM-1蛋白酶原核表达载体的检测 | 第22-23页 |
| 2.2.12 嗜盐古菌Natrinema-IM-1蛋白酶原核表达载体的保存 | 第23-24页 |
| 3 结果分析 | 第24-32页 |
| 3.1 嗜盐古菌的富集培养 | 第24页 |
| 3.2 嗜盐古菌3种蛋白酶基因的来源 | 第24-26页 |
| 3.2.1 Protease | 第25页 |
| 3.2.2 Serineprotease | 第25-26页 |
| 3.2.3 Metal-dependentproease | 第26页 |
| 3.3 嗜盐古菌Natrinema-IM-1总基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| 3.4 目的片段的扩增 | 第27-29页 |
| 3.4.1 PCR产物测序 | 第27-29页 |
| 3.5 原核表达载体的构建 | 第29页 |
| 3.6 重组表达载体的检测鉴定 | 第29-31页 |
| 3.6.1 菌落PCR | 第29-30页 |
| 3.6.2 质粒的提取及双酶切检测 | 第30-31页 |
| 3.7 重组质粒转入表达型感受态细胞 | 第31-32页 |
| 4 结论与讨论 | 第32-35页 |
| 4.1 结论 | 第32页 |
| 4.2 讨论 | 第32-35页 |
| 4.2.1 PCR | 第32-33页 |
| 4.2.2 引物设计 | 第33页 |
| 4.2.3 载体的选择 | 第33-34页 |
| 4.2.4 后续实验的蛋白诱导表达 | 第34-35页 |
| 致谢 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-38页 |
| 作者简介 | 第38页 |
