| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 英文缩略词 | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 概述 | 第12-13页 |
| 1.2 ADAM 家族蛋白的结构 | 第13-14页 |
| 1.3 ADAM 家族蛋白的功能 | 第14-19页 |
| 1.3.1 ADAM 与肿瘤的转移与侵袭 | 第15-17页 |
| 1.3.2 ADAM 与血管新生 | 第17页 |
| 1.3.3 ADAM 与几条重要的信号通路 | 第17-18页 |
| 1.3.4 ADAM 家族蛋白与细胞周期 | 第18-19页 |
| 1.4 ADAM 家族蛋白主要成员的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.5 ADAM15 与 ADAM15 去整合素区域的研究进展 | 第21-23页 |
| 1.5.1 ADAM15 的基因 | 第21页 |
| 1.5.2 ADAM15 的功能 | 第21-22页 |
| 1.5.3 ADAM15 去整合素区域蛋白的功能研究进展 | 第22-23页 |
| 1.6 本文主要研究内容 | 第23-25页 |
| 1.6.1 本文立题背景 | 第23页 |
| 1.6.2 研究思路与内容 | 第23-25页 |
| 第二章 大肠杆菌表达 rhddADAM15 的结构及体外重折叠 | 第25-37页 |
| 2.1 前言 | 第25-26页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第26页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第26页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-29页 |
| 2.3.1 rhddADAM15 的同源结构模拟 | 第26页 |
| 2.3.2 液相色谱串联四极杆飞行时间质谱分析 rhddADAM15 的结构和分子量 | 第26-27页 |
| 2.3.3 LC-MS 分析 rhddADAM15 还原处理后的短肽组成 | 第27页 |
| 2.3.4 圆二色谱分析计算 rhddADAM15 二级结构含量 | 第27页 |
| 2.3.5 rhddADAM15 的蛋白免疫印迹(Western Blot, WB)鉴定 | 第27页 |
| 2.3.6 体外重折叠 | 第27-28页 |
| 2.3.7 生物活性法评价蛋白重折叠效率 | 第28-29页 |
| 2.4 实验结果 | 第29-35页 |
| 2.4.1 rhddADAM15 的同源结构模拟 | 第29-30页 |
| 2.4.2 大肠杆菌表达的 rhddADAM15 结构单一性鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4.3 液质联用分析 rhddADAM15 结构及分子量 | 第31-33页 |
| 2.4.4 体外重折叠生物活性 | 第33-34页 |
| 2.4.5 HPLC-MS 鉴定重折叠后的 rhddADAM15 的分子量及结构单一性 | 第34-35页 |
| 2.5 讨论 | 第35-36页 |
| 2.6 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 rhddADAM15 与人血清白蛋白融合蛋白的表达及活性研究 | 第37-46页 |
| 3.1 前言 | 第37-38页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第38-39页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第38页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第38-39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-40页 |
| 3.3.1 引物设计与合成 | 第39页 |
| 3.3.2 目的基因克隆与重组表达质粒的构建 | 第39页 |
| 3.3.3 毕赤酵母的转化、表达及纯化 | 第39-40页 |
| 3.3.4 重组蛋白 Western Blot 鉴定 | 第40页 |
| 3.3.5 目的产物的活性鉴定 | 第40页 |
| 3.4 实验结果 | 第40-44页 |
| 3.4.1 HSA-rhddADAM15 的构建与鉴定 | 第40-41页 |
| 3.4.2 HSA-rhddADAM15 的表达与分离纯化 | 第41-43页 |
| 3.4.3 HSA-rhddADAM15-His 的 Western Blot 鉴定 | 第43页 |
| 3.4.4 HSA-rhddADAM15-His 的活性分析 | 第43-44页 |
| 3.5 讨论 | 第44-45页 |
| 3.6 小结 | 第45-46页 |
| 第四章 大肠杆菌表达的 rhddADAM15 抗肿瘤活性研究 | 第46-53页 |
| 4.1 前言 | 第46-47页 |
| 4.2 实验材料 | 第47页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第47页 |
| 4.3 实验方法 | 第47-48页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第47-48页 |
| 4.3.2 SRB 法测 rhddADAM15 对细胞增殖的影响 | 第48页 |
| 4.3.3 划痕法检测 rhddADAM15 对各细胞迁移的影响 | 第48页 |
| 4.3.4 斑马鱼肿瘤细胞移植模型检测 rhddADAM15 活性 | 第48页 |
| 4.4 实验结果 | 第48-51页 |
| 4.4.1 rhddADAM15 抑制肿瘤细胞增殖 | 第48-49页 |
| 4.4.2 rhddADAM15 抑制肿瘤细胞的迁移 | 第49-50页 |
| 4.4.3 rhddADAM15 抑制斑马鱼体内肝癌细胞 Bel-7402 的增殖及迁移 | 第50-51页 |
| 4.5 讨论 | 第51-52页 |
| 4.6 小结 | 第52-53页 |
| 第五章 大肠杆菌表达 rhddADAM15 对血管生成的影响 | 第53-66页 |
| 5.1 前言 | 第53-55页 |
| 5.2 实验材料 | 第55-56页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第55页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第55-56页 |
| 5.3 实验方法 | 第56-57页 |
| 5.3.1 SRB 法检测 rhddADAM15 对血管内皮细胞 Eahy926 增殖影响 | 第56页 |
| 5.3.2 划痕法检测 rhddADAM15 对血管内皮细胞 Eahy926 迁移影响 | 第56页 |
| 5.3.3 rhddADAM15 对细胞体外成管影响 | 第56页 |
| 5.3.4 碘化丙啶(Propidium iodide, PI)单染法检测细胞周期 | 第56页 |
| 5.3.5 Annexin V-FITC/PI 双染法分析细胞凋亡 | 第56-57页 |
| 5.3.6 血管荧光斑马鱼模型检测 rhddADAM15 对斑马鱼血管生成的影响 | 第57页 |
| 5.4 实验结果 | 第57-65页 |
| 5.4.1 rhddADAM15 抑制 Eahy926 增殖、迁移、成管及 8988 细胞成管 | 第57-59页 |
| 5.4.2 rhddADAM15 对 Eahy926 细胞周期的影响及凋亡的诱导 | 第59-61页 |
| 5.4.3 rhddADAM15 抑制斑马鱼肠下血管生成 | 第61-63页 |
| 5.4.4 rhddADAM15 抑制斑马鱼节间血管生成 | 第63-65页 |
| 5.5 讨论 | 第65页 |
| 5.6 小结 | 第65-66页 |
| 第六章 大肠杆菌表达 rhddADAM15 抑制肝癌细胞 Bel-7402 增殖的机理初探 | 第66-77页 |
| 6.1 前言 | 第66-67页 |
| 6.2 实验材料与仪器 | 第67-68页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第67-68页 |
| 6.2.2 实验仪器 | 第68页 |
| 6.3 实验方法 | 第68-69页 |
| 6.3.1 Caspase 活性检测 | 第68页 |
| 6.3.2 Western Blot 检测 | 第68-69页 |
| 6.3.3 PI 单染法分析 rhddADAM15 对 Bel-7420 细胞周期的影响 | 第69页 |
| 6.3.4 DAPI 单染检测细胞凋亡 | 第69页 |
| 6.3.5 斑马鱼体内凋亡诱导 | 第69页 |
| 6.4 实验结果 | 第69-75页 |
| 6.4.1 rhddADAM15 对 Bel-7402 细胞周期的影响 | 第69-71页 |
| 6.4.2 rhddADAM15 诱导 Bel-7402 细胞凋亡及斑马鱼体细胞凋亡 | 第71-74页 |
| 6.4.3 rhddADAM15 对 Bel-7402 细胞 Src 激酶表达及磷酸化的影响 | 第74-75页 |
| 6.5 讨论 | 第75-76页 |
| 6.6 小结 | 第76-77页 |
| 主要结论与展望 | 第77-79页 |
| 主要结论 | 第77页 |
| 展望 | 第77-79页 |
| 论文主要创新点 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-92页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第92页 |
