| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 引言 | 第8-14页 |
| 1.1 本课题研究意义 | 第8页 |
| 1.2 国内外研究概况 | 第8-10页 |
| 1.3 定点突变原理 | 第10-11页 |
| 1.4 包涵体的相关研究 | 第11-14页 |
| 1.4.1 包涵体的定义及变复性研究 | 第11-12页 |
| 1.4.2 包涵体的结构及功能 | 第12-14页 |
| 第二章 pET28a-GcGASA中12个Cys单突变体的构建及表达 | 第14-26页 |
| 2.1 实验装置介绍 | 第14-17页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第14页 |
| 2.1.2 主要仪器和设备 | 第14-15页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第15页 |
| 2.1.4 主要溶液及配制 | 第15-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-21页 |
| 2.2.1 野生型重组质粒pET-28a(+)-gcgasa的抽提 | 第17页 |
| 2.2.2 引物的设计 | 第17-18页 |
| 2.2.3 PCR定点突变和条件优化 | 第18-19页 |
| 2.2.4 DpnI限制性内切酶消化 | 第19页 |
| 2.2.5 质粒转化、菌落PCR及测序 | 第19页 |
| 2.2.6 突变体的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第19-21页 |
| 2.3 实验结果 | 第21-24页 |
| 2.3.1 重组质粒pET-28a-gcgasa的电泳结果 | 第21-22页 |
| 2.3.2 定点突变结果 | 第22-23页 |
| 2.3.3 菌落PCR结果 | 第23页 |
| 2.3.4 突变体诱导表达的SDS-PAGE检测结果 | 第23-24页 |
| 2.4 讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 Cys突变对于全细胞及包涵体抗氧化的影响 | 第26-36页 |
| 3.1 实验仪器和试剂 | 第26-27页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第26页 |
| 3.1.2 主要试剂及配置 | 第26-27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-28页 |
| 3.2.1 半胱氨酸突变体对大肠杆菌抗氧化活性的检测 | 第27页 |
| 3.2.2 包涵体的制备与洗涤 | 第27页 |
| 3.2.3 半胱氨酸突变体对包涵体抗氧化活性的检测 | 第27-28页 |
| 3.3 实验结果 | 第28-34页 |
| 3.3.1 半胱氨酸突变体对大肠杆菌抗氧化活性的影响 | 第28-30页 |
| 3.3.2 半胱氨酸突变对包涵体抗氧化活性的影响 | 第30-34页 |
| 3.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 运用FTIR手段研究GcGASA包涵体的二级结构 | 第36-40页 |
| 4.1 实验器材及试剂 | 第36页 |
| 4.2 实验方法 | 第36页 |
| 4.2.1 包涵体的纯化 | 第36页 |
| 4.2.2 样品的制备 | 第36页 |
| 4.2.3 红外光谱检测及数据分析 | 第36页 |
| 4.3 实验结果 | 第36-38页 |
| 4.4 讨论 | 第38-40页 |
| 第五章 结束语 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
