| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 前言 | 第13-23页 |
| 1. 对虾白斑综合征病毒（WSSV）研究概况 | 第14-19页 |
| 1.1 WSSV 生物学特征和宿主范围 | 第14-15页 |
| 1.2 WSSV 感染过程和方式 | 第15页 |
| 1.3 WSSV 的囊膜蛋白和功能研究 | 第15-18页 |
| 1.4 WSSV 囊膜蛋白与宿主细胞受体的相互作用 | 第18-19页 |
| 2. Runt 转录因子的研究情况 | 第19页 |
| 3. 荧光微球应用的相关研究 | 第19-21页 |
| 3.1 在检测方面的应用 | 第20页 |
| 3.2 在标记和示踪方面的作用 | 第20-21页 |
| 4. 展望 | 第21-23页 |
| 第一章 运用荧光显微镜观察凡纳滨对虾细胞对FITC标记的WSSV 几种囊膜蛋白的内吞现象 | 第23-30页 |
| 1.实验材料和仪器 | 第23-24页 |
| 1.1 材料 | 第23页 |
| 1.2 试剂 | 第23-24页 |
| 1.3 仪器 | 第24页 |
| 2.实验方法 | 第24-26页 |
| 2.1 几种重组囊膜蛋白的制备 | 第24页 |
| 2.2 重组囊膜蛋白的 FITC 标记 | 第24页 |
| 2.3 凡纳滨对虾血淋巴细胞的原代培养 | 第24-25页 |
| 2.4 凡纳滨对虾甲壳下表皮细胞、造血细胞和淋巴细胞的原代培养 | 第25页 |
| 2.5 对虾细胞对 FITC 标记的重组囊膜蛋白的内吞作用实验 | 第25-26页 |
| 3.结果 | 第26-29页 |
| 3.1 几种重组 WSSV 囊膜蛋白的制备 | 第26页 |
| 3.2 凡纳滨对虾血细胞对几种 FITC 标记的囊膜蛋白的内吞作用 | 第26-27页 |
| 3.3 凡纳滨对虾不同宿主细胞对 WSSV 囊膜蛋白的内吞作用 | 第27-29页 |
| 4.讨论 | 第29-30页 |
| 第二章 应用流式荧光微球法研究 WSSV 囊膜蛋白与凡纳滨对虾血细胞的相互作用 | 第30-43页 |
| 第一节 应用流式荧光微球法研究凡纳滨对虾血细胞对几种 WSSV 囊膜蛋白的内吞作用 | 第31-37页 |
| 1.材料和仪器 | 第31页 |
| 1.1 材料 | 第31页 |
| 1.2 仪器 | 第31页 |
| 2.方法 | 第31-33页 |
| 2.1 荧光微球与囊膜蛋白的偶联（以 VP37 为例） | 第31-32页 |
| 2.2 紫外检测囊膜蛋白与荧光微球偶联效率 | 第32页 |
| 2.3 间接免疫荧光法检测偶联效果 | 第32-33页 |
| 2.4 流式细胞术双荧光法检测对虾血细胞对囊膜蛋白的内吞作用 | 第33页 |
| 3.结果 | 第33-36页 |
| 3.1 紫外检测蛋白偶联效率结果（表 2-1） | 第33-34页 |
| 3.2 间接免疫荧光法验证蛋白 rVP37 的偶联情况 | 第34-35页 |
| 3.3 流式检测 WSSV 囊膜蛋白 VP26、VP28 和 VP37 与对虾血细胞的作用 | 第35-36页 |
| 4.讨论 | 第36-37页 |
| 第二节 BP53、Rab7 和 AK 分别对 rVP37、rVP28 和 rVP31 的细胞内吞抑制实验 | 第37-43页 |
| 1.材料和仪器 | 第37页 |
| 1.1 材料 | 第37页 |
| 1.2 仪器 | 第37页 |
| 2.方法 | 第37-38页 |
| 3.结果 | 第38-41页 |
| 4.讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 凡纳滨对虾 Runt 转录因子的基因克隆及序列分析31 | 第43-55页 |
| 1．材料 | 第43-44页 |
| 1.1 凡纳滨对虾和 WSSV 病料 | 第43页 |
| 1.2 试验试剂和仪器 | 第43-44页 |
| 2．实验方法 | 第44-48页 |
| 2.1 凡纳滨对虾血细胞总 RNA 的提取 | 第44页 |
| 2.2 cDNA 第一链的合成 | 第44-45页 |
| 2.3 同源克隆 lvrunt cDNA 片段 | 第45-46页 |
| 2.4 5'-RACE 和 3'-RACE 获得 cDNA 全长序列 | 第46-48页 |
| 2.5 凡纳滨对虾 Runt 基因的 cDNA 序列分析及其编码的多肽序列分析 | 第48页 |
| 3．结果 | 第48-53页 |
| 3.1 同源克隆获得 lvrunt 基因的保守区域片段 | 第48-49页 |
| 3.2 lvrunt 基因的 5’RACE 和 3’RACE 结果 | 第49-50页 |
| 3.3 lvrunt 全长序列特征 | 第50-51页 |
| 3.4 凡纳滨对虾转录因子（LvRunt）蛋白结构特征分析 | 第51-52页 |
| 3.5 不同种类 Runt 保守性分析 | 第52-53页 |
| 4．讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 凡纳滨对虾 Runt 基因的组织表达分布以及注射造血激素、WSSV 病毒后转录水平变化 | 第55-63页 |
| 1.实验材料和仪器 | 第55-56页 |
| 1.1 试剂和材料 | 第55页 |
| 1.2 实验仪器 | 第55-56页 |
| 2.实验方法 | 第56-58页 |
| 2.1 WSSV 病毒粗提液的制备 | 第56页 |
| 2.2 凡纳滨对虾造血激素 LvAST 纯化蛋白的制备 | 第56-57页 |
| 2.3 lvrunt 基因的组织表达分析 | 第57页 |
| 2.4 凡纳滨对虾的攻毒实验 | 第57页 |
| 2.5 凡纳滨对虾的注射 LvAST 实验 | 第57页 |
| 2.6 lvrunt 转录量的测定（含有 RNA 提取和荧光定量 PCR） | 第57-58页 |
| 3.结果 | 第58-62页 |
| 3.1 lvrunt 和 18S rRNA 荧光定量引物特异性检测 | 第58-59页 |
| 3.2 lvrunt 基因在凡纳滨对虾体内的不同组织表达差异 | 第59-60页 |
| 3.3 注射对虾造血激素(Astakine)后 lvrunt 基因转录水平变化 | 第60-61页 |
| 3.4 注射 WSSV 后 lvrunt 基因的表达变化 | 第61-62页 |
| 4.讨论 | 第62-63页 |
| 第五章 凡纳滨对虾 Runt 的原核表达及其对凡纳滨对虾感染WSSV 的保护作用研究 | 第63-72页 |
| 1.实验材料 | 第63-64页 |
| 1.1 质粒和菌种 | 第63页 |
| 1.2 实验试剂和仪器 | 第63页 |
| 1.3 实验试剂的配置 | 第63-64页 |
| 2.实验方法 | 第64-67页 |
| 2.1 重组质粒的构建 | 第64-66页 |
| 2.2 LvRunt 的诱导表达和表达产物的 SDS-PAGE 分析 | 第66页 |
| 2.3 原核表达的凡纳滨对虾 Runt 蛋白纯化以及 Western-blot 分析 | 第66页 |
| 2.4 LvRunt 蛋白的免疫保护实验 | 第66-67页 |
| 3.结果 | 第67-71页 |
| 3.1 质粒 pBAD/ gIIIA 与 lvrunt 目的片段的制备 | 第67-68页 |
| 3.2 重组质粒(pBAD/ gIIIA-lvrunt)的构建 | 第68-69页 |
| 3.3 lvrunt 表达产物分析及蛋白的纯化 | 第69-70页 |
| 3.4 LvRunt 对凡纳滨对虾感染 WSSV 的相对保护作用结果 | 第70-71页 |
| 4.讨论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 个人简历 | 第78页 |
| 个人学术成果 | 第78-79页 |
