| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 引言 | 第10-17页 |
| 1.1 土壤中磷元素存在的问题 | 第10页 |
| 1.2 微生物解磷的意义 | 第10页 |
| 1.3 溶磷微生物的研究现状 | 第10-11页 |
| 1.4 磷细菌的分类 | 第11-12页 |
| 1.5 解磷细菌的解磷机理 | 第12-14页 |
| 1.5.1 解无机磷细菌的解磷机理 | 第12-13页 |
| 1.5.2 解有机磷细菌的解磷机理 | 第13-14页 |
| 1.6 磷细菌解磷能力的研究方法 | 第14-15页 |
| 1.6.1 平板法 | 第14页 |
| 1.6.2 土培(或砂培)法 | 第14页 |
| 1.6.3 液体培养法 | 第14-15页 |
| 1.6.4 同位素示踪法 | 第15页 |
| 1.7 研究的目的与意义 | 第15页 |
| 1.8 实验技术路线 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-31页 |
| 2.1 材料 | 第17-22页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第17页 |
| 2.1.2 土样来源 | 第17页 |
| 2.1.3 培养基 | 第17-19页 |
| 2.1.4 试剂的配制 | 第19-22页 |
| 2.2 试验原理及方法 | 第22-30页 |
| 2.2.1 解有机磷细菌的分离纯化 | 第22页 |
| 2.2.2 解磷圈的测定 | 第22页 |
| 2.2.3 液体培养法测定菌株的解磷能力 | 第22-23页 |
| 2.2.4 形态鉴定 | 第23页 |
| 2.2.5 解有机磷细菌的生理生化特征鉴定 | 第23-25页 |
| 2.2.6 菌株的分子生物学鉴定 | 第25-29页 |
| 2.2.6.1 解有机磷细菌DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.6.2 引物的设计 | 第26页 |
| 2.2.6.3 目的片段的扩增、检测 | 第26-27页 |
| 2.2.6.4 目的片段的回收 | 第27页 |
| 2.2.6.5 将PCR回收产物与pMD19-T载体连接 | 第27页 |
| 2.2.6.6 E.Coli感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.6.7 重组质粒的转化 | 第28页 |
| 2.2.6.8 菌落PCR | 第28-29页 |
| 2.2.6.9 序列分析及构建系统发育树 | 第29页 |
| 2.2.7 菌株解磷特性的分析 | 第29-30页 |
| 2.2.7.1 不同C、N源培养基菌株解磷含量的测定 | 第29页 |
| 2.2.7.2 复筛菌株胞外蛋白的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.7.3 SDS-PAGE对提取的胞外蛋白检测 | 第30页 |
| 2.2.7.4 葡聚糖凝胶柱层析 | 第30页 |
| 2.2.7.5 SDS-PAGE测定胞外蛋白的大小 | 第30页 |
| 2.3 数据处理 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-47页 |
| 3.1 解有机磷细菌的分离、筛选 | 第31-32页 |
| 3.2 液体培养法检测有机磷细菌的解磷能力 | 第32-33页 |
| 3.2.1 磷标准曲线的绘制 | 第32页 |
| 3.2.2 液体培养法测定解磷细菌的解磷能力 | 第32-33页 |
| 3.3 解有机磷细菌的生理生化鉴定 | 第33-36页 |
| 3.4 分子生物学鉴定 | 第36-39页 |
| 3.4.1 16S rDNA的克隆 | 第37-38页 |
| 3.4.2 DNA测序结果 | 第38页 |
| 3.4.3 系统发育树的构建 | 第38-39页 |
| 3.5 菌株解磷特性的分析 | 第39-47页 |
| 3.5.1 不同C源培养基菌株解磷含量的测定 | 第39-41页 |
| 3.5.2 不同N源培养基菌株解磷含量的测定 | 第41-42页 |
| 3.5.3 SDS-PAGE检测 | 第42-44页 |
| 3.5.4 葡聚糖凝胶柱层析 | 第44-46页 |
| 3.5.5 SDS-PAGE测定胞外蛋白的大小 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 附录 | 第54-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
