| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第1章 安莎霉素合成基因簇中酰胺合酶的结构解析 | 第11-45页 |
| 1.1 引言 | 第11-16页 |
| 1.2 材料方法 | 第16-30页 |
| 1.2.1 菌株、质粒与培养基 | 第16页 |
| 1.2.2 试剂材料、工具酶和服务 | 第16页 |
| 1.2.3 主要仪器 | 第16-18页 |
| 1.2.4 溶液配制 | 第18-20页 |
| 1.2.5 酰胺合酶基因的克隆 | 第20-24页 |
| 1.2.6 酰胺合酶的诱导表达 | 第24-25页 |
| 1.2.7 RifF蛋白的突变体构建 | 第25-26页 |
| 1.2.8 酰胺合酶的纯化 | 第26-27页 |
| 1.2.9 RifF稳定性检测与稳定剂筛选 | 第27-28页 |
| 1.2.10 蛋白质结晶条件的筛选与优化 | 第28-29页 |
| 1.2.11 蛋白质晶体衍射与结构解析 | 第29-30页 |
| 1.3 结果与讨论 | 第30-41页 |
| 1.3.1 酰胺合酶诱导表达 | 第30-32页 |
| 1.3.2 酰胺合酶纯化 | 第32-33页 |
| 1.3.3 酰胺合酶结晶条件筛选 | 第33-34页 |
| 1.3.4 RifF结晶条件优化 | 第34-39页 |
| 1.3.5 160111AS蛋白结构解析与分析 | 第39-41页 |
| 1.4 本章总结 | 第41-45页 |
| 第2章 组成型表达LAL家族正调控基因激活链霉菌XZQH13中沉默的ansatrienin基因簇 | 第45-55页 |
| 2.1 引言 | 第45-46页 |
| 2.2 材料方法 | 第46-50页 |
| 2.2.1 菌株与培养基 | 第46页 |
| 2.2.2 试剂、工具酶和服务 | 第46-47页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第47页 |
| 2.2.4 Streptomyces sp.XZQH13中安莎霉素合成基因簇部分序列注释 | 第47页 |
| 2.2.5 LAL家族调控基因的克隆与组成型表达质粒的构建 | 第47-48页 |
| 2.2.6 ET12567/pUZ8002与Streptomyces sp.XZQH13的接合转移 | 第48-49页 |
| 2.2.7 反转录PCR | 第49页 |
| 2.2.8 突变株的发酵与代谢产物的HPLC检测 | 第49-50页 |
| 2.2.9 差异峰化合物的分离与结构鉴定 | 第50页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第50-53页 |
| 2.3.1 Streptomyces sp.XZQH13中部分安莎基因簇的序列分析 | 第50-52页 |
| 2.3.2 组成型表达LAL家族调控基因激活ansp基因簇 | 第52-53页 |
| 2.3.3 差异峰对应产物的结构鉴定结果 | 第53页 |
| 2.4 本章总结 | 第53-55页 |
| 第3章 链霉菌XZYN4中rify与nay基因簇的激活 | 第55-73页 |
| 3.1 引言 | 第55-58页 |
| 3.2 方法材料 | 第58-65页 |
| 3.2.1 菌株、质粒与培养基 | 第58-59页 |
| 3.2.2 仪器、试剂、工具酶和服务 | 第59-60页 |
| 3.2.3 基因簇注释与分析 | 第60页 |
| 3.2.4 调控基因的组成型表达 | 第60-61页 |
| 3.2.5 Streptomyces sp.XZYN4电转化条件摸索 | 第61-62页 |
| 3.3.6 Streptomyces sp.XZYN4接合转移条件优化 | 第62页 |
| 3.2.7 rify与nay基因簇的敲除 | 第62页 |
| 3.2.8 添加稀土元素发酵 | 第62-63页 |
| 3.2.9 nay基因簇调控因子的敲除 | 第63页 |
| 3.2.10 黑色素基因的敲除 | 第63页 |
| 3.2.11 化合物提取与HPLC检测 | 第63-65页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第65-71页 |
| 3.3.1 rify与nay基因簇注释与分析 | 第65-66页 |
| 3.3.2 rify与nay基因簇调控基因组成型过表达突变株的发酵检测 | 第66页 |
| 3.3.3 Streptomyces sp.XZYN4基因操作条件优化 | 第66-68页 |
| 3.3.4 rify与nay基因簇敲除突变株的发酵检测 | 第68页 |
| 3.3.5 添加稀土元素进行发酵 | 第68-69页 |
| 3.3.6 nay基因簇调控因子的敲除 | 第69-70页 |
| 3.3.7 黑色素基因的敲除 | 第70-71页 |
| 3.4 本章总结 | 第71-73页 |
| 附录 | 第73-85页 |
| 参考文献 | 第85-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第90页 |
