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山羊关节炎脑炎病毒分子检测技术研究

中文摘要第3-4页
ABSTRACT第4-5页
第一章 文献综述:山羊关节炎脑炎病毒研究进展第10-31页
    1.1 历史与现状第10-11页
    1.2 病原学第11-18页
        1.2.1 分类地位和形态学特征第11页
        1.2.2 理化与生物学特征第11-12页
        1.2.3 病毒的生物学周期第12-13页
        1.2.4 CAEV 的分子生物学特征第13-18页
    1.3 流行病学特点第18-20页
        1.3.1 易感动物第18-19页
        1.3.2 传播途径第19页
        1.3.3 流行特点及其影响因素第19页
        1.3.4 流行情况第19-20页
    1.4 致病性第20-22页
        1.4.1 临床症状第20-21页
        1.4.2 组织病理变化第21页
        1.4.3 致病机理第21-22页
    1.5 免疫特性第22-24页
    1.6 诊断第24-28页
        1.6.1 初步诊断第24-25页
        1.6.2 病毒的分离与鉴定第25页
        1.6.3 病原的检测技术研究进展第25-26页
        1.6.4 抗体检测技术研究进展第26-28页
        1.6.5 鉴别诊断第28页
    1.7 防治第28-29页
        1.7.1 加强引种管理第28页
        1.7.2 加强饲养管理第28-29页
    1.8 公共卫生学意义第29-30页
        1.8.1 CAEV 与食品安全第29页
        1.8.2 CAEV 与HIV第29-30页
    1.9 存在的问题第30页
    1.10 研究的目的与意义第30-31页
第二章 CAEV89-GB1026 株全基因组序列测定与分子特性分析第31-65页
    2.1 实验材料第31-35页
        2.1.1 毒株第31页
        2.1.2 载体与菌株第31页
        2.1.3 主要试剂第31页
        2.1.4 细胞培养所用溶液及其配制第31-32页
        2.1.5 DNA 提取用试剂及配制第32-33页
        2.1.6 大肠杆菌感受态细胞制备及转化、诱导用溶液第33页
        2.1.7 质粒DNA 小量提取用溶液第33-34页
        2.1.8 琼脂糖凝胶电泳所用溶液第34页
        2.1.9 分析用序列第34-35页
    2.2 方法第35-40页
        2.2.1 胎山羊滑膜(GSM)细胞的培养及传代第35-36页
        2.2.2 CAEV 的增殖第36页
        2.2.3 CAEV 感染的GSM 细胞中总DNA 的提取第36页
        2.2.4 引物设计第36-37页
        2.2.5 CAEV 全基因组片段的PCR 扩增第37页
        2.2.6 目的片段的纯化与回收第37-38页
        2.2.7 PCR 产物的克隆与序列测定第38-40页
        2.2.8 序列的拼接与分析第40页
    2.3 结果与分析第40-62页
        2.3.1 CAEV 的增殖第40-41页
        2.3.2 CAEV89-GB1026 全基因组序列的克隆第41页
        2.3.3 CAEV89-GB1026 全基因组序列解析第41-42页
        2.3.4 5’-LTR 分析第42-44页
        2.3.5 结构蛋白分析第44-56页
        2.3.6 调节蛋白分析第56-59页
        2.3.7 3’-LTR 分析第59-60页
        2.3.8 同源性分析第60-62页
    2.4 讨论第62-64页
        2.4.1 CAEV 全基因组克隆和分析第62-63页
        2.4.2 遗传进化分析第63-64页
    2.5 小结第64-65页
第三章 CAEV 环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立第65-77页
    3.1 材料第65-66页
        3.1.1 毒株及血清第65页
        3.1.2 待检样品第65页
        3.1.3 主要试剂第65-66页
    3.2 方法第66-69页
        3.2.1 引物设计第66页
        3.2.2 检测样品的处理第66-67页
        3.2.3 琼脂糖凝胶扩散实验第67页
        3.2.4 DNA 的提取第67页
        3.2.5 LAMP 反应和结果判定第67-68页
        3.2.6 LAMP 的灵敏性实验第68页
        3.2.7 PCR 检测第68-69页
    3.3 结果第69-75页
        3.3.1 LAMP 引物的筛选第69-70页
        3.3.2 LAMP 灵敏性实验第70页
        3.3.3 LAMP 定量试验第70-71页
        3.3.4 样品处理方法的确定第71-72页
        3.3.5 样品检测结果第72-75页
    3.4 讨论第75-76页
        3.4.1 CAEV LAMP 检测方法的建立第75页
        3.4.2 关于LAMP 检测方法第75-76页
    3.5 小结第76-77页
第四章 CAEV 衣壳蛋白P25 的原核表达与纯化第77-95页
    4.1 材料第77-80页
        4.1.1 载体与菌株第77页
        4.1.2 主要试剂第77-80页
    4.2 方法第80-86页
        4.2.1 P25 蛋白特性的生物信息学分析第80页
        4.2.2 引物的设计与合成第80页
        4.2.3 P25 原核重组表达载体的构建第80-82页
        4.2.4 重组表达菌的诱导表达第82页
        4.2.5 SDS-聚丙烯凝胶电泳第82-83页
        4.2.6 表达蛋白的纯化第83-84页
        4.2.7 Western blot 分析第84-85页
        4.2.8 ELISA 检测方法的初步建立第85-86页
    4.3 结果第86-92页
        4.3.1 CAEV P25 蛋白及拟表达重组蛋白的特性分析第86-88页
        4.3.2 重组表达载体的鉴定第88-89页
        4.3.3 重组菌的诱导表达和纯化第89-90页
        4.3.4 重组蛋白的特异性鉴定第90页
        4.3.5 ELISA 检测方法的初步建立第90-92页
    4.4 讨论第92-94页
        4.4.1 衣壳蛋白P25 的重组表达第92-93页
        4.4.2 CAEV 感染的ELISA 检测方法的建立第93-94页
    4.5 小结第94-95页
第五章 结论第95-96页
参考文献第96-107页
附录1 缩略词表第107-108页
附录2 主要仪器第108-109页
附录3 主要生化试剂第109-110页
附录4 CAEV89-GB1026(Shanxi)株全基因组解析第110-116页
发表论文和科研情况说明第116-117页
致谢第117页

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