中文摘要 | 第3-4页 |
ABSTRACT | 第4-5页 |
第一章 文献综述:山羊关节炎脑炎病毒研究进展 | 第10-31页 |
1.1 历史与现状 | 第10-11页 |
1.2 病原学 | 第11-18页 |
1.2.1 分类地位和形态学特征 | 第11页 |
1.2.2 理化与生物学特征 | 第11-12页 |
1.2.3 病毒的生物学周期 | 第12-13页 |
1.2.4 CAEV 的分子生物学特征 | 第13-18页 |
1.3 流行病学特点 | 第18-20页 |
1.3.1 易感动物 | 第18-19页 |
1.3.2 传播途径 | 第19页 |
1.3.3 流行特点及其影响因素 | 第19页 |
1.3.4 流行情况 | 第19-20页 |
1.4 致病性 | 第20-22页 |
1.4.1 临床症状 | 第20-21页 |
1.4.2 组织病理变化 | 第21页 |
1.4.3 致病机理 | 第21-22页 |
1.5 免疫特性 | 第22-24页 |
1.6 诊断 | 第24-28页 |
1.6.1 初步诊断 | 第24-25页 |
1.6.2 病毒的分离与鉴定 | 第25页 |
1.6.3 病原的检测技术研究进展 | 第25-26页 |
1.6.4 抗体检测技术研究进展 | 第26-28页 |
1.6.5 鉴别诊断 | 第28页 |
1.7 防治 | 第28-29页 |
1.7.1 加强引种管理 | 第28页 |
1.7.2 加强饲养管理 | 第28-29页 |
1.8 公共卫生学意义 | 第29-30页 |
1.8.1 CAEV 与食品安全 | 第29页 |
1.8.2 CAEV 与HIV | 第29-30页 |
1.9 存在的问题 | 第30页 |
1.10 研究的目的与意义 | 第30-31页 |
第二章 CAEV89-GB1026 株全基因组序列测定与分子特性分析 | 第31-65页 |
2.1 实验材料 | 第31-35页 |
2.1.1 毒株 | 第31页 |
2.1.2 载体与菌株 | 第31页 |
2.1.3 主要试剂 | 第31页 |
2.1.4 细胞培养所用溶液及其配制 | 第31-32页 |
2.1.5 DNA 提取用试剂及配制 | 第32-33页 |
2.1.6 大肠杆菌感受态细胞制备及转化、诱导用溶液 | 第33页 |
2.1.7 质粒DNA 小量提取用溶液 | 第33-34页 |
2.1.8 琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第34页 |
2.1.9 分析用序列 | 第34-35页 |
2.2 方法 | 第35-40页 |
2.2.1 胎山羊滑膜(GSM)细胞的培养及传代 | 第35-36页 |
2.2.2 CAEV 的增殖 | 第36页 |
2.2.3 CAEV 感染的GSM 细胞中总DNA 的提取 | 第36页 |
2.2.4 引物设计 | 第36-37页 |
2.2.5 CAEV 全基因组片段的PCR 扩增 | 第37页 |
2.2.6 目的片段的纯化与回收 | 第37-38页 |
2.2.7 PCR 产物的克隆与序列测定 | 第38-40页 |
2.2.8 序列的拼接与分析 | 第40页 |
2.3 结果与分析 | 第40-62页 |
2.3.1 CAEV 的增殖 | 第40-41页 |
2.3.2 CAEV89-GB1026 全基因组序列的克隆 | 第41页 |
2.3.3 CAEV89-GB1026 全基因组序列解析 | 第41-42页 |
2.3.4 5’-LTR 分析 | 第42-44页 |
2.3.5 结构蛋白分析 | 第44-56页 |
2.3.6 调节蛋白分析 | 第56-59页 |
2.3.7 3’-LTR 分析 | 第59-60页 |
2.3.8 同源性分析 | 第60-62页 |
2.4 讨论 | 第62-64页 |
2.4.1 CAEV 全基因组克隆和分析 | 第62-63页 |
2.4.2 遗传进化分析 | 第63-64页 |
2.5 小结 | 第64-65页 |
第三章 CAEV 环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立 | 第65-77页 |
3.1 材料 | 第65-66页 |
3.1.1 毒株及血清 | 第65页 |
3.1.2 待检样品 | 第65页 |
3.1.3 主要试剂 | 第65-66页 |
3.2 方法 | 第66-69页 |
3.2.1 引物设计 | 第66页 |
3.2.2 检测样品的处理 | 第66-67页 |
3.2.3 琼脂糖凝胶扩散实验 | 第67页 |
3.2.4 DNA 的提取 | 第67页 |
3.2.5 LAMP 反应和结果判定 | 第67-68页 |
3.2.6 LAMP 的灵敏性实验 | 第68页 |
3.2.7 PCR 检测 | 第68-69页 |
3.3 结果 | 第69-75页 |
3.3.1 LAMP 引物的筛选 | 第69-70页 |
3.3.2 LAMP 灵敏性实验 | 第70页 |
3.3.3 LAMP 定量试验 | 第70-71页 |
3.3.4 样品处理方法的确定 | 第71-72页 |
3.3.5 样品检测结果 | 第72-75页 |
3.4 讨论 | 第75-76页 |
3.4.1 CAEV LAMP 检测方法的建立 | 第75页 |
3.4.2 关于LAMP 检测方法 | 第75-76页 |
3.5 小结 | 第76-77页 |
第四章 CAEV 衣壳蛋白P25 的原核表达与纯化 | 第77-95页 |
4.1 材料 | 第77-80页 |
4.1.1 载体与菌株 | 第77页 |
4.1.2 主要试剂 | 第77-80页 |
4.2 方法 | 第80-86页 |
4.2.1 P25 蛋白特性的生物信息学分析 | 第80页 |
4.2.2 引物的设计与合成 | 第80页 |
4.2.3 P25 原核重组表达载体的构建 | 第80-82页 |
4.2.4 重组表达菌的诱导表达 | 第82页 |
4.2.5 SDS-聚丙烯凝胶电泳 | 第82-83页 |
4.2.6 表达蛋白的纯化 | 第83-84页 |
4.2.7 Western blot 分析 | 第84-85页 |
4.2.8 ELISA 检测方法的初步建立 | 第85-86页 |
4.3 结果 | 第86-92页 |
4.3.1 CAEV P25 蛋白及拟表达重组蛋白的特性分析 | 第86-88页 |
4.3.2 重组表达载体的鉴定 | 第88-89页 |
4.3.3 重组菌的诱导表达和纯化 | 第89-90页 |
4.3.4 重组蛋白的特异性鉴定 | 第90页 |
4.3.5 ELISA 检测方法的初步建立 | 第90-92页 |
4.4 讨论 | 第92-94页 |
4.4.1 衣壳蛋白P25 的重组表达 | 第92-93页 |
4.4.2 CAEV 感染的ELISA 检测方法的建立 | 第93-94页 |
4.5 小结 | 第94-95页 |
第五章 结论 | 第95-96页 |
参考文献 | 第96-107页 |
附录1 缩略词表 | 第107-108页 |
附录2 主要仪器 | 第108-109页 |
附录3 主要生化试剂 | 第109-110页 |
附录4 CAEV89-GB1026(Shanxi)株全基因组解析 | 第110-116页 |
发表论文和科研情况说明 | 第116-117页 |
致谢 | 第117页 |