冰岛硫化叶菌xpb基因的遗传学分析
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 1 前言 | 第8-20页 |
| 1.1 古菌概述 | 第8-10页 |
| 1.2 模式生物冰岛硫化叶菌 | 第10-11页 |
| 1.3 冰岛硫化叶菌的遗传敲除体系 | 第11-15页 |
| 1.3.1 宿主菌株 | 第12-13页 |
| 1.3.2 选择标记 | 第13-14页 |
| 1.3.3 转化方法 | 第14页 |
| 1.3.4 基因敲除策略 | 第14-15页 |
| 1.4 古菌的核苷酸切除修复 | 第15-18页 |
| 1.4.1 古菌中细菌型NER途径研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4.2 古菌中真核生物型NER途径研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第20-21页 |
| 2.1.2 主要药品和试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 培养基及试剂配方 | 第22-23页 |
| 2.1.4 分子操作类试剂盒 | 第23页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-34页 |
| 2.2.1 基因敲除原理 | 第23-25页 |
| 2.2.2 基因敲除载体构建过程 | 第25-30页 |
| 2.2.3 基因敲除载体的电转化 | 第30-31页 |
| 2.2.4 双交换转化子的筛选和验证 | 第31-32页 |
| 2.2.5 目的基因缺失突变体的筛选和验证 | 第32页 |
| 2.2.6 突变体的流式细胞分析 | 第32页 |
| 2.2.7 突变体的4-NQO处理 | 第32-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-39页 |
| 3.1 敲除载体构建片段的电泳检测 | 第34页 |
| 3.2 敲除载体的酶切验证和测序分析 | 第34-35页 |
| 3.3 双交换转化子的PCR验证 | 第35-36页 |
| 3.4 目的基因缺失突变体的PCR验证 | 第36-37页 |
| 3.5 突变体的流式细胞分析结果 | 第37-38页 |
| 3.6 突变体的4-NQO处理结果 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-42页 |
| 4.1 MID基因敲除策略解析 | 第39页 |
| 4.2 突变体Mb1(Δxpbl)流式细胞分析 | 第39-40页 |
| 4.3 突变体4-NQO敏感性分析 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 附录 | 第47-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
