| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 前言 | 第13-39页 |
| 1 褐飞虱的生物学特性及其危害 | 第13-16页 |
| 1.1 褐飞虱的生物学特性 | 第13-14页 |
| 1.2 褐飞虱的危害 | 第14-15页 |
| 1.3 褐飞虱的防治 | 第15-16页 |
| 2 植物对昆虫的防御 | 第16-20页 |
| 2.1 昆虫的消化系统 | 第16-17页 |
| 2.2 植物中参与防御昆虫的基因 | 第17页 |
| 2.3 JA诱导和取食诱导的抗营养蛋白 | 第17-20页 |
| 2.3.1 蛋白酶抑制剂和凝集素 | 第18-19页 |
| 2.3.2 作用于植物防御的酶类 | 第19-20页 |
| 3 昆虫对宿主植物的适应及其防卫策略 | 第20-24页 |
| 3.1 糖转运蛋白在昆虫取食植物中的重要作用 | 第20-21页 |
| 3.2 胰蛋白酶在昆虫取食植物中的重要作用 | 第21-22页 |
| 3.3 羧肽酶在昆虫取食植物中的重要作用 | 第22页 |
| 3.4 昆虫对宿主植物的适应 | 第22-24页 |
| 4 RNA干扰的研究进展 | 第24-37页 |
| 4.1 RNA干扰研究的发展历史 | 第24-25页 |
| 4.2 RNA干扰的原理 | 第25-26页 |
| 4.3 RNAi细胞的传输机制—RNA的吸收和输出 | 第26-29页 |
| 4.4 昆虫RNAi的导入方法 | 第29-30页 |
| 4.4.1 喂食工程菌HT115表达的dsRNA | 第29页 |
| 4.4.2 直接喂食dsRNA | 第29-30页 |
| 4.4.3 显微注射dsRNA | 第30页 |
| 4.5 昆虫体内RNAi实现环境 | 第30-31页 |
| 4.6 RNAi相关基因的研究 | 第31-35页 |
| 4.6.1 sid-1基因的研究 | 第31-32页 |
| 4.6.2 Argonaute基因的研究 | 第32-34页 |
| 4.6.3 RNAi其它基因的研究 | 第34-35页 |
| 4.7 RNAi在昆虫领域的应用 | 第35-37页 |
| 4.7.1 RNAi在研究昆虫功能基因中的应用 | 第35-36页 |
| 4.7.2 RNAi在研究昆虫信号传导通路中的应用 | 第36页 |
| 4.7.3 RNAi与植物抗虫 | 第36-37页 |
| 5. 研究目的及意义 | 第37-39页 |
| 第二章 褐飞虱RNAi相关基因的全长cDNA的克隆和序列分析 | 第39-74页 |
| 1. 材料和方法 | 第39-49页 |
| 1.1 材料 | 第39页 |
| 1.2 EST来源和RACE引物 | 第39-40页 |
| 1.3 褐飞虱总RNA和不同生长发育时期及不同组织的RNA的提取 | 第40-41页 |
| 1.4 5’RACE扩增 | 第41-44页 |
| 1.5 3’RACE扩增 | 第44-45页 |
| 1.6 生物信息学分析 | 第45页 |
| 1.7 实时荧光定量PCR检测Nlsid-1和Nlaub转录差异 | 第45-46页 |
| 1.8 Nlaub保守功能域原核表达 | 第46-49页 |
| 1.8.1 Nlaub基因保守功能域目的片段的扩增及纯化 | 第46-47页 |
| 1.8.2 pET30a载体准备 | 第47-48页 |
| 1.8.3 融合蛋白的诱导 | 第48-49页 |
| 2、结果与分析 | 第49-71页 |
| 2.1 褐飞虱Nlsid-1基因全长cDNA的克隆及表达分析 | 第49-56页 |
| 2.1.1 褐飞虱Nlsid-1基因的克隆及生物信息学分析 | 第49-54页 |
| 2.1.2 褐飞虱Nlsid-1基因不同生长发育时期和组织的分析 | 第54-56页 |
| 2.2 褐飞虱Nlaub基因全长cDNA的克隆及表达分析 | 第56-66页 |
| 2.2.1 褐飞虱Nlaub基因的克隆及生物信息学分析 | 第56-62页 |
| 2.2.2 褐飞虱Nlaub基因不同生长发育时期和组织的分析 | 第62-63页 |
| 2.2.3 Aubergine保守功能域原核表达质粒的构建和原核表达 | 第63-66页 |
| 2.3 褐飞虱NIRLC基因全长cDNA的克隆及表达分析 | 第66-70页 |
| 2.4 褐飞虱Nlpasha基因全长cDNA的克隆及表达分析 | 第70-71页 |
| 3、讨论 | 第71-74页 |
| 3.1 Nlsid-1基因在褐飞虱中的作用 | 第71-72页 |
| 3.2 Nlaub基因在褐飞虱中的作用 | 第72页 |
| 3.3 其他RNAi相关基因在褐飞虱中的作用 | 第72-74页 |
| 第三章 褐飞虱中肠基因克隆及原核表达dsRNA载体构建 | 第74-86页 |
| 1. 材料和方法 | 第74-77页 |
| 1.1 材料 | 第74页 |
| 1.2 构建褐飞虱L4440-EST原核表达载体 | 第74-76页 |
| 1.3 原核表达褐飞虱L4440-EST-dsRNA和dsRNA的提取 | 第76-77页 |
| 1.4 Nltry,Nlcar的克隆 | 第77页 |
| 1.5 生物信息学分析 | 第77页 |
| 1.6 RT-PCR检测NIHT1,Nltry,Nlcar转录差异 | 第77页 |
| 2、结果与分析 | 第77-83页 |
| 2.1 褐飞虱EST原核表达载体的构建及dsRNA的表达 | 第77-79页 |
| 2.2 褐飞虱中肠基因的克隆及表达 | 第79-83页 |
| 2.2.1 褐飞虱Nlcar基因的克隆 | 第79-80页 |
| 2.2.2 褐飞虱Nltry基因的克隆 | 第80-81页 |
| 2.2.3 褐飞虱NIHT1的生物信息学分析 | 第81-83页 |
| 2.2.4 褐飞虱中肠基因不同生长发育时期和组织的分析 | 第83页 |
| 3、讨论 | 第83-86页 |
| 3.1 原核表达dsRNA沉默昆虫基因 | 第84页 |
| 3.2 褐飞虱中肠基因(NIHT1,Nltry,Nlcar)在昆虫取食时的重要作用 | 第84-86页 |
| 第四章 利用植物介导的RNAi敲除褐飞虱中肠基因 | 第86-109页 |
| 1. 材料和方法 | 第86-95页 |
| 1.1 材料 | 第86页 |
| 1.2 RNAi载体的构建 | 第86-88页 |
| 1.3. 农杆菌介导的对粳稻品种H1493的遗传转化 | 第88-90页 |
| 1.4. 转基因植株的Southern分析 | 第90-93页 |
| 1.5. Northern blot分析 | 第93页 |
| 1.6 siRNA Northern bolt | 第93-94页 |
| 1.7 荧光定量PCR | 第94页 |
| 1.8 褐飞虱生理测定 | 第94-95页 |
| 1.8.1 褐飞虱的存活率 | 第94页 |
| 1.8.2 褐飞虱的宿主选择性 | 第94-95页 |
| 1.8.3 褐飞虱虫重的测定 | 第95页 |
| 2、结果与分析 | 第95-107页 |
| 2.1 褐飞虱中肠基因(NIHT1,Nltry,Nlcar)的RNAi载体的构建 | 第95-97页 |
| 2.2. 转基因植株的获得 | 第97-100页 |
| 2.3 转基因植株的表型鉴定 | 第100-102页 |
| 2.4 转基因植株的Northern blot和siRNA blot分析 | 第102-103页 |
| 2.5 转基因植株对褐飞虱的影响 | 第103-107页 |
| 2.5.1 褐飞虱取食转基因植株后体内靶标基因沉默 | 第103-105页 |
| 2.5.2 褐飞虱取食转基因植株后死亡率的影响 | 第105-106页 |
| 2.5.3 褐飞虱的宿主选择性 | 第106-107页 |
| 2.5.4 褐飞虱取食转基因植株对虫重的影响 | 第107页 |
| 3. 讨论 | 第107-109页 |
| 第五章 总讨论 | 第109-114页 |
| 1. 克隆及鉴定褐飞虱RNAi相关基因 | 第109-110页 |
| 2. 褐飞虱取食dsRHA转基因水稻后抑制靶标基因的表达 | 第110-114页 |
| 参考文献 | 第114-125页 |
| 附录Ⅰ 实验室常用Protocol及所用溶液配方 | 第125-128页 |
| 水稻组织培养培养基 | 第125-128页 |
| 附录Ⅱ 博士在读期间发表的学术论文 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129页 |
