| 中文摘要 | 第10-15页 |
| Abstract | 第15-20页 |
| 前言 | 第21-22页 |
| 文献回顾 | 第22-48页 |
| 第一部分 胶质瘤与胶质瘤干细胞 | 第22-31页 |
| 第二部分 NOTCH 信号通路 | 第31-33页 |
| 第三部分 MICRORNAS（微 RNAs，miRNAs） | 第33-48页 |
| 第一部分 FHL1A 在胶质瘤中低表达及其对胶质瘤增殖的抑制作用 | 第48-65页 |
| 实验一：FHL1A 在胶质瘤中的表达分析 | 第48-55页 |
| 1 材料 | 第48-50页 |
| 1.1 胶质瘤标本来源 | 第48页 |
| 1.2 主要试剂 | 第48-49页 |
| 1.3 常用缓冲液 | 第49页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第49-50页 |
| 2 方法 | 第50-51页 |
| 2.1 Western Blot | 第50页 |
| 2.2 免疫组化（Immunohistochemistry，IHC） | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-54页 |
| 3.1 FHL1 在胶质瘤中的表达低于相应瘤周正常脑组织 | 第51-52页 |
| 3.2 在胶质瘤中的表达与胶质瘤级别及预后相关 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-55页 |
| 实验二、FHL1A 可抑制胶质瘤的增殖 | 第55-61页 |
| 1 材料 | 第55-56页 |
| 1.1 细胞来源 | 第55页 |
| 1.2 主要试剂 | 第55-56页 |
| 1.3 常用缓冲液系统 | 第56页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第56页 |
| 2 方法 | 第56-58页 |
| 2.1 Western blot | 第56页 |
| 2.2 流式细胞技术进行细胞周期分析 | 第56-57页 |
| 2.3 MTT 法观察细胞的增殖 | 第57页 |
| 2.4 FHL1A 过表达及干涉慢病毒载体的构建 | 第57-58页 |
| 2.5 FHL1A 过表达及干涉慢病毒载体包装 | 第58页 |
| 2.6 慢病毒感染稳转细胞系的构建 | 第58页 |
| 3 结果 | 第58-60页 |
| 3.1 FHL1A 在 U251 中有表达，而在 U87 中则无表达 | 第58-59页 |
| 3.2 构建了 U87 过表达 FHL1A 及 U251 干涉 FHLA 的稳转细胞系 | 第59页 |
| 3.3 FHL1A 可抑制胶质瘤细胞系的增殖（MTT 法） | 第59-60页 |
| 3.4 FHL1A 可抑制胶质瘤细胞系的增殖（流式细胞仪检测） | 第60页 |
| 4 讨论 | 第60-61页 |
| 实验三、FHL1A 通过抑制 PI3K/AKT 信号通路抑制胶质瘤增殖 | 第61-65页 |
| 1 材料 | 第61-62页 |
| 1.1 细胞来源 | 第61页 |
| 1.2 主要试剂 | 第61-62页 |
| 1.3 常用缓冲液系统 | 第62页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第62页 |
| 2 方法 | 第62页 |
| 2.1 Western blot | 第62页 |
| 2.2 流式细胞技术进行细胞周期分析 | 第62页 |
| 2.3 MTT 法观察细胞的增殖 | 第62页 |
| 3 结果 | 第62-63页 |
| 3.1 过表达 FHL1A 可抑制 AKT 的磷酸化，而抑制 FHL1A 可促进其磷酸化 | 第62-63页 |
| 3.2 PI3K/AKT 通路特异性抑制剂 LY294002 抑制剂可抑制 FHL1A 对 U251增殖的促进作用（MTT 法） | 第63页 |
| 3.3 PI3K/AKT 通路特异性抑制剂 LY294002 抑制剂可抑制 FHL1A 对增殖的促进作用（流式细胞仪检测细胞周期） | 第63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| 第二部分 MICRORNA-342-5P 调控胶质瘤干细胞增殖及分化作用研究 | 第65-90页 |
| 实验一、microRNA-342-5p 在胶质瘤中的表达及其与级别的关系 | 第65-70页 |
| 1 材料 | 第65-66页 |
| 1.1 胶质瘤标本来源 | 第65页 |
| 1.2 主要试剂 | 第65页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第65-66页 |
| 2 方法 | 第66-68页 |
| 2.1 胶质瘤标本 RNA 的提取，定量及反转录 | 第66-67页 |
| 2.2 miR-342-5p 分子表达的检测 | 第67-68页 |
| 3 结果 | 第68-70页 |
| 3.1 miRNA 的芯片结果由本实验室提供 | 第68-69页 |
| 3.2 miR-342-5p 在胶质瘤中的表达低于相应瘤周正常脑组织 | 第69页 |
| 3.3 miR-342-5p 的表达与胶质瘤级别呈负相关关系 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70页 |
| 实验二 胶质瘤干细胞（GSCSs）的原代培养及鉴定 | 第70-76页 |
| 1 材料 | 第70-72页 |
| 1.1 细胞来源 | 第70页 |
| 1.2 主要试剂 | 第70-71页 |
| 1.3 常用配置试剂和培养液 | 第71页 |
| 1.4 主要仪器 | 第71-72页 |
| 2 方法 | 第72-73页 |
| 2.1 胶质瘤样品的获取 | 第72页 |
| 2.2 GSCs 的原代培养 | 第72页 |
| 2.3 GSCs 的分化培养 | 第72页 |
| 2.4 免疫荧光染色 | 第72-73页 |
| 2.5 用于 GSCs 培养的胶质瘤患者临床资料 | 第73页 |
| 3 结果 | 第73-75页 |
| 3.1 GSCs 克隆球原代培养及鉴定 | 第73-74页 |
| 3.2 GSCs 多向分化潜能及免疫荧光鉴定 | 第74页 |
| 3.3 胶质瘤病人资料的整理收集 | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75-76页 |
| 实验三 miR-342-5p 在胶质瘤干细胞与非干细胞表达差异及 Notch 信号通路对miR-342-5p 表达的调控 | 第76-79页 |
| 1 材料 | 第76-77页 |
| 1.1 细胞来源 | 第76页 |
| 1.2 主要试剂 | 第76页 |
| 1.3 常用配置试剂和培养液 | 第76-77页 |
| 1.4 主要仪器 | 第77页 |
| 2 方法 | 第77-78页 |
| 2.1 胶质瘤干细胞及非干细胞 RNA 的提取，定量及反转录 | 第77页 |
| 2.2 实时定量 PCR | 第77页 |
| 2.3 原代 GSCs 培养 | 第77页 |
| 2.4 原代普通胶质瘤细胞的培养 | 第77-78页 |
| 3 结果 | 第78-79页 |
| 3.1 miR-342-5p 及 Notch 信号途径效应分子 Hes1、Hes5 在胶质瘤干细胞与非干细胞表达差异 | 第78页 |
| 3.2 Notch 信号途径可抑制胶质瘤干细胞中 miR-342-5p 的表达 | 第78-79页 |
| 4 讨论 | 第79页 |
| 实验四 miR-342-5p 对 GSCSs 生物学功能的影响 | 第79-85页 |
| 1 材料 | 第79-80页 |
| 1.1 细胞来源 | 第79-80页 |
| 1.2 主要试剂 | 第80页 |
| 1.3 缓冲液和培养基 | 第80页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第80页 |
| 2 方法 | 第80-82页 |
| 2.1 GSCs 的原代培养 | 第80页 |
| 2.2 细胞转染 | 第80-81页 |
| 2.3 miR-342-5p 对 GSCs 增殖能力影响的观察 | 第81页 |
| 2.4 miR-342-5p 对 GSCs 分化影响的观察 | 第81-82页 |
| 2.5 反转录及实时定量 PCR | 第82页 |
| 2.6 免疫荧光染色 | 第82页 |
| 3 结果 | 第82-84页 |
| 3.1 miR-342-5p 可抑制 GSCs 的分化（光镜观察） | 第82页 |
| 3.2 miR-342-5p 可抑制 GSCs 的增殖（免疫荧光结果） | 第82页 |
| 3.3 miR-342-5p 可抑制 GSCs 的分化（免疫荧光结果） | 第82页 |
| 3.4 miR-342-5p 可抑制 GSCs 的分化（实时定量 PCR） | 第82-84页 |
| 4 讨论 | 第84-85页 |
| 实验五 miR-342-5p 通过癌基因 Pokemon 影响 GSCSs 的生物学功能 | 第85-90页 |
| 1 材料 | 第85页 |
| 1.1 细胞来源 | 第85页 |
| 1.2 主要试剂 | 第85页 |
| 2 方法 | 第85-87页 |
| 2.1 pokemon3’UTR 区 pGL3 promoter 报告基因载体的构建 | 第85-86页 |
| 2.2 pcDNA6.2-miR-342-5p 载体的构建 | 第86页 |
| 2.3 细胞转染 | 第86-87页 |
| 2.4 报告基因检测 | 第87页 |
| 2.5 细胞 RNA 的提取，定量，反转录 | 第87页 |
| 2.6 细胞蛋白提取，定量，westernblot | 第87页 |
| 3 结果 | 第87-89页 |
| 3.1 miR-342-5p 下游靶基因的预测 | 第87-88页 |
| 3.2 miR-342-5p 对 pokemon（ZBTB-7A）的调控作用 | 第88-89页 |
| 4 讨论 | 第89-90页 |
| 小结 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-109页 |
| 个人简历和研究成果 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
