| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一章 绪论 | 第14-17页 |
| 1.1 课题研究的背景、目的和意义 | 第14页 |
| 1.2 国内外研究概况 | 第14-16页 |
| 1.3 论文的主要研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 NET-1 shRNA抑癌作用的研究 | 第17-46页 |
| 2.1. 材料 | 第17-22页 |
| 2.1.1 实验细胞 | 第17页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第18-21页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第21-22页 |
| 2.2 实验流程与方法 | 第22-35页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第22-23页 |
| 2.2.2 细胞转染 | 第23页 |
| 2.2.3 RT-qPCR检测基因mRNA的表达水平 | 第23-25页 |
| 2.2.4 蛋白免疫印迹（Western Blots）检测细胞蛋白表达水平 | 第25-26页 |
| 2.2.5 细胞免疫荧光实验 | 第26-27页 |
| 2.2.6 NET-1 基因文库构建及siRNA靶点筛选 | 第27-31页 |
| 2.2.7 靶向NET-1 的shRNA的构建 | 第31-34页 |
| 2.2.8 MTT法检测细胞增殖 | 第34页 |
| 2.2.9 流式细胞仪检测细胞周期 | 第34页 |
| 2.2.10 Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡 | 第34-35页 |
| 2.2.11 Hoechst染色检测细胞凋亡 | 第35页 |
| 2.2.12 统计学分析 | 第35页 |
| 2.3 结果 | 第35-45页 |
| 2.3.1 筛选实验HCC细胞株 | 第35-37页 |
| 2.3.2 NET-1 基因全位点siRNA分布及靶点筛选 | 第37-38页 |
| 2.3.3 根据N29靶点构建NET-1 shRNA | 第38-40页 |
| 2.3.4 转染NET-1 shRNA对HCC细胞株生物学行为的影响 | 第40-45页 |
| 2.4 结论 | 第45-46页 |
| 第三章 NET-1 shRNA转染HCC细胞后基因表达差异及相关生物学信息的分析 | 第46-64页 |
| 3.1 材料 | 第46-47页 |
| 3.1.1 实验细胞 | 第46页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第46-47页 |
| 3.1.3 主要试剂和材料 | 第47页 |
| 3.2 实验流程与方法 | 第47-54页 |
| 3.2.1 细胞总RNA提取 | 第47-48页 |
| 3.2.2 总RNA的纯化 | 第48页 |
| 3.2.3 人类全转录组基因芯片检测 | 第48-53页 |
| 3.2.4 芯片结果生物学信息分析 | 第53-54页 |
| 3.2.5 统计学处理 | 第54页 |
| 3.3 结果 | 第54-63页 |
| 3.3.1 RNA提取质量的检测结果 | 第54-55页 |
| 3.3.2 MHCC97H细胞转染NET-1 shRNA后差异基因表达和生物学信息分析 | 第55-59页 |
| 3.3.3 MHCC97L细胞转染NET-1 shRNA后差异基因表达和生物学信息分析 | 第59-63页 |
| 3.4 结论 | 第63-64页 |
| 第四章 NET-1 shRNA抑癌机制研究 | 第64-79页 |
| 4.1 材料 | 第64-65页 |
| 4.1.1 实验细胞 | 第64页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第64页 |
| 4.1.3 主要试剂与材料 | 第64-65页 |
| 4.2 实验流程与方法 | 第65-68页 |
| 4.2.1 细胞的培养与转染 | 第65页 |
| 4.2.2 RT-qPCR检测基因mRNA表达水平 | 第65-66页 |
| 4.2.3 WB检测基因蛋白表达水平 | 第66页 |
| 4.2.4 免疫共沉淀 | 第66-67页 |
| 4.2.5 目的基因过表达载体构建 | 第67页 |
| 4.2.6 细胞免疫荧光实验 | 第67页 |
| 4.2.7 统计学分析 | 第67-68页 |
| 4.3 结果 | 第68-78页 |
| 4.3.1 MHCC97H转染NET-1 shRNA后上调CHEK2基因与p53激活的相关性 | 第68-72页 |
| 4.3.2 MHCC97L转染NET-1 shRNA后下调MDM4基因与p53激活的相关性 | 第72-77页 |
| 4.3.3 HCC细胞转染NET-1 shRNA后与p53信号调控相关的增殖和凋亡分子的表达 | 第77-78页 |
| 4.4 结论 | 第78-79页 |
| 第五章 讨论 | 第79-86页 |
| 参考文献 | 第86-91页 |
| 英文缩写词表 | 第91-92页 |
| 综述 1 | 第92-101页 |
| 综述1参考文献 | 第98-101页 |
| 综述 2 | 第101-110页 |
| 综述2参考文献 | 第107-110页 |
| 在攻读硕士学位期间公开发表的论文 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 附录：攻读学位期间获得的主要荣誉 | 第112-114页 |
