| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-16页 |
| 1 溶藻弧菌 | 第9页 |
| 2 T6SS与TssJ蛋白 | 第9页 |
| 3 转录组及其研究方法 | 第9-13页 |
| 3.1 转录组 | 第9-10页 |
| 3.2 转录组研究方法 | 第10-13页 |
| 3.2.1 基因芯片 | 第11页 |
| 3.2.2 表达序列标签(EST)技术 | 第11页 |
| 3.2.3 RNA-Seq技术 | 第11-13页 |
| 4 原核表达载体 | 第13-14页 |
| 5 研究目的及意义 | 第14-15页 |
| 6 技术路线 | 第15-16页 |
| 6.1 溶藻弧菌转录组测序技术路线图 | 第15页 |
| 6.2 tssJ原核表达及多克隆抗体制备技术路线 | 第15-16页 |
| 第二章 溶藻弧菌野生株和突变株△tssJ的差异表达序列分析 | 第16-31页 |
| 1 前言 | 第16页 |
| 2 实验材料 | 第16-17页 |
| 2.1 菌株 | 第16页 |
| 2.2 主要试剂材料及仪器 | 第16-17页 |
| 2.2.1 主要试剂材料 | 第16-17页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第17页 |
| 3 实验方法 | 第17-21页 |
| 3.1 提取RNA时间确定 | 第17-18页 |
| 3.2 总RNA的提取 | 第18-19页 |
| 3.3 RNA文库构建 | 第19页 |
| 3.4 文库质量控制 | 第19页 |
| 3.5 转录组测序 | 第19页 |
| 3.6 转录组分析 | 第19-20页 |
| 3.7 荧光定量PCR(RT-PCR) | 第20-21页 |
| 4 结果与分析 | 第21-28页 |
| 4.1 总RNA浓度测定及质控检测 | 第21-23页 |
| 4.2 测序数据产出统计 | 第23页 |
| 4.3 数据组装结果 | 第23-24页 |
| 4.3.1 组装结果统计 | 第23页 |
| 4.3.2 测序结果与组装结果的比对统计 | 第23-24页 |
| 4.4 差异表达分析 | 第24-25页 |
| 4.4.1 差异表达基因筛选 | 第24-25页 |
| 4.5 差异表达基因功能注释和富集分析 | 第25-28页 |
| 4.5.1 差异表达基因GO功能富集 | 第25-26页 |
| 4.5.2 差异表达基因COG分类 | 第26页 |
| 4.5.3 差异基因的KEGG富集分析 | 第26-28页 |
| 4.6 RT-PCR结果 | 第28页 |
| 5 讨论 | 第28-31页 |
| 第三章 溶藻弧菌tssJ基因原核表达及多克隆抗体制备 | 第31-46页 |
| 1 前言 | 第31页 |
| 2 实验材料 | 第31-35页 |
| 2.1 菌株、质粒及培养条件 | 第31页 |
| 2.2 实验动物 | 第31页 |
| 2.3 主要试剂材料及仪器 | 第31-32页 |
| 2.3.1 主要试剂材料 | 第31-32页 |
| 2.3.2 主要仪器 | 第32页 |
| 2.4 常用溶液配制 | 第32-35页 |
| 3 实验方法 | 第35-42页 |
| 3.1 tssJ基因的获得 | 第35-38页 |
| 3.1.1 WT基因组DNA提取 | 第35页 |
| 3.1.2 目的片段扩增 | 第35-36页 |
| 3.1.3 感受态细胞制备 | 第36-37页 |
| 3.1.4 溶藻弧菌tssJ基因与T载体连接 | 第37页 |
| 3.1.5 T-tssJ的转化 | 第37页 |
| 3.1.6 重组质粒的筛选与鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2 表达重组质粒构建及鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.1 pET32a质粒处理 | 第38页 |
| 3.2.2 表达载体构建及转化 | 第38-39页 |
| 3.2.3 重组质粒筛选与鉴定 | 第39页 |
| 3.3 tssJ基因的诱导表达 | 第39页 |
| 3.4 SDS-PAGE分析 | 第39-40页 |
| 3.5 tssJ基因表达产物大量表达及纯化 | 第40-41页 |
| 3.5.1 tssJ基因表达产物大量表达 | 第40页 |
| 3.5.2 目的蛋白纯化 | 第40-41页 |
| 3.6 多克隆抗体制备 | 第41页 |
| 3.7 抗体效价测定 | 第41-42页 |
| 4 结果 | 第42-44页 |
| 4.1 tssJ基因的扩增 | 第42页 |
| 4.2 表达载体构建与检测 | 第42页 |
| 4.3 tssJ基因表达产物SDS-PAGE电泳分析 | 第42-43页 |
| 4.4 tssJ基因表达产物的纯化 | 第43-44页 |
| 4.5 抗体效价的检测 | 第44页 |
| 5 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 结论 | 第46-47页 |
| 中英文缩略词表 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 作者在读期间发表论文情况 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
