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Hsf4在晶状体上皮细胞中的抗凋亡分子机制

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-7页
英文缩略词表第11-12页
引言第12-14页
1、实验仪器,试剂与材料第14-18页
    1.1 实验仪器第14页
    1.2 主要试剂配制第14-16页
        1.2.1 抗体第14-15页
        1.2.2 其它试剂配制第15-16页
    1.3 所需材料第16-18页
2、实验方法第18-26页
    2.1 制备感受态细胞第18页
    2.2 细胞培养及药物处理第18页
    2.3 细胞传代和铺板第18-19页
    2.4 细胞冻存第19页
    2.5 细胞转染及感染第19-20页
        2.5.1 细胞转染第19页
        2.5.2 细胞感染第19-20页
    2.6 RNA提取和cDNA的反转录第20-21页
    2.7 线粒体分离及蛋白抽提第21-22页
    2.8 活性氧检测第22页
        2.8.1 收集细胞后装载探针第22页
        2.8.2 原位装载探针第22页
    2.9 线粒体膜电位检测第22-23页
    2.10 Western Blot第23-24页
        2.10.1 细胞蛋白提取第23页
        2.10.2 配制SDS-PAGE凝胶第23页
        2.10.3 跑SDS-PAGE凝胶第23-24页
    2.11 免疫沉淀实验第24页
    2.12 原核蛋白表达和PULL DOWN实验第24-25页
    2.13 免疫荧光及共聚焦荧光显微镜观察第25-26页
3、实验结果第26-38页
    3.1 在晶状体上皮细胞中,Hsf4b能抵抗顺铂刺激导致的细胞凋亡第26-27页
    3.2 在晶状体上皮细胞中,Hsf4b抵抗双氧水处理导致的细胞凋亡,不抑制紫外照射诱导的细胞凋亡第27-29页
    3.3 ERK1/2 的磷酸化修饰没有参与到Hsf4b在晶状体上皮细胞中的抗凋亡功能第29-30页
    3.4 Hsf4b敲除后导致晶状体上皮细胞中的线粒体膜电位降低第30页
    3.5 Hsf4b抑制细胞色素C从线粒体向胞质中的释放第30-32页
    3.6 Hsf4b敲除后,晶状体上皮细胞中的促凋亡因子Bax定位到线粒体膜第32-33页
    3.7 在Hsf4b过表达的晶状体上皮细胞中,构建敲除 αB-crystallin的细胞系第33页
    3.8 Hsf4b的下游基因 αB-crystallin参与Hsf4b的抗凋亡功能第33-35页
    3.9 αB-crystallin是通过与Bax和细胞色素C相互作用参与抗凋亡第35-36页
    3.10 Hsf4b通过调控 αB-crystallin的表达参与ROS清除过程第36-38页
4、讨 论第38-42页
结论第42-44页
参考文献第44-48页
综述第48-58页
    参考文献第54-58页
致谢第58-60页
在校期间获得的奖励和科研成果第60-61页

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