| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略表 | 第10-14页 |
| 1 引言 | 第14-22页 |
| 1.1 肺表面活性物质的组成 | 第14-15页 |
| 1.2 肺表面活性蛋白B的结构与功能 | 第15-17页 |
| 1.3 肺表面活性蛋白B的生物物理活性 | 第17-19页 |
| 1.4 急性肺损伤与肺表面活性蛋白B | 第19页 |
| 1.5 瑞替普酶 | 第19-20页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第20页 |
| 1.7 研究内容及技术路线 | 第20-22页 |
| 2 肺表面活性蛋白B的融合表达特性研究 | 第22-33页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 SP-B基因合成与引物设计 | 第23页 |
| 2.2.2 SP-B的PCR扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.3 pGEX4T-1/SP-B表达载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.4 IPTG诱导SP-B表达 | 第25-26页 |
| 2.2.5 Western Blot检测SP-B的表达 | 第26页 |
| 2.2.6 GST/SP-B蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-31页 |
| 2.3.1 稀有密码子的优化 | 第27页 |
| 2.3.2 GST/SP-B融合表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.3.3 重组蛋白的表达与分析 | 第28-29页 |
| 2.3.4 Western Blot结果分析 | 第29-30页 |
| 2.3.5 重组蛋白的纯化结果 | 第30-31页 |
| 2.4 结论与讨论 | 第31-33页 |
| 3 r-PA/SP-B融合表达载体构建 | 第33-41页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第33-34页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第33页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-37页 |
| 3.2.1 设计依据 | 第34页 |
| 3.2.2 r-PA基因序列与SP-B基因来源 | 第34页 |
| 3.2.3 融合表达质粒的构建 | 第34-35页 |
| 3.2.4 融合表达质粒的鉴定 | 第35-37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-39页 |
| 3.3.1 融合表达质粒构建结果 | 第37页 |
| 3.3.2 融合表达质粒鉴定结果 | 第37-38页 |
| 3.3.3 融合表达质粒测序结果 | 第38-39页 |
| 3.3.4 融合表达质粒Western Blot检测结果 | 第39页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第39-41页 |
| 4 r-PA/SP-B的细胞荧光定位 | 第41-49页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第41-42页 |
| 4.1.1 主要试剂材料 | 第41页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第41-42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-44页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第42页 |
| 4.2.2 瞬时转染和转染效率 | 第42-43页 |
| 4.2.3 r-PA与r-PA/SP-B的细胞荧光定位 | 第43-44页 |
| 4.3 结果与分析 | 第44-48页 |
| 4.3.1 细胞培养结果 | 第44-45页 |
| 4.3.2 脂质体转染细胞毒性分析结果 | 第45-46页 |
| 4.3.3 pEZ-M03质粒在CCL149细胞中的荧光定位 | 第46页 |
| 4.3.4 r-PA细胞荧光定位结果 | 第46-47页 |
| 4.3.5 r-PA/SP-B细胞荧光定位结果 | 第47-48页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第48-49页 |
| 5 基于ALI的r-PA/SP-B功能研究 | 第49-58页 |
| 5.1 材料与仪器 | 第49页 |
| 5.1.1 主要试剂材料 | 第49页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第49页 |
| 5.2 实验方法 | 第49-51页 |
| 5.2.1 细胞培养与脂质体转染 | 第49-50页 |
| 5.2.2 细胞损伤模型的构建 | 第50页 |
| 5.2.3 细胞拉曼光谱扫描 | 第50-51页 |
| 5.2.4 r-PA/SP-B纤溶酶活性的测定 | 第51页 |
| 5.3 结果与分析 | 第51-56页 |
| 5.3.1 细胞损伤模型构建结果 | 第51-53页 |
| 5.3.2 CCL149细胞损伤模型融合蛋白的定位 | 第53-54页 |
| 5.3.3 细胞拉曼光谱扫描结果 | 第54-55页 |
| 5.3.4 r-PA/SP-B纤溶酶活性测定结果 | 第55-56页 |
| 5.4 结论与讨论 | 第56-58页 |
| 6 总结与展望 | 第58-61页 |
| 6.1 总结 | 第58-59页 |
| 6.2 展望 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
