| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 1 前言 | 第13-25页 |
| 1.1 微生物表面展示技术概述 | 第13-15页 |
| 1.1.1 微生物表面展示系统的组成 | 第14-15页 |
| 1.1.2 常用的锚定蛋白种类及其特性 | 第15页 |
| 1.2 微生物表面展示系统的种类 | 第15-18页 |
| 1.2.1 噬菌体展示系统 | 第15-16页 |
| 1.2.2 细菌展示系统 | 第16-17页 |
| 1.2.3 酵母展示系统 | 第17-18页 |
| 1.3 大肠杆菌表面展示系统 | 第18-19页 |
| 1.4 谷氨酸及其检测方法 | 第19-21页 |
| 1.4.1 谷氨酸简介 | 第19-20页 |
| 1.4.2 谷氨酸检测方法 | 第20-21页 |
| 1.5 谷氨酸脱氢酶 | 第21-23页 |
| 1.6 研究的目的及意义 | 第23-25页 |
| 2 来自于B.subtilis的谷氨酸脱氢酶在大肠杆菌表面展示系统的构建 | 第25-48页 |
| 2.1 引言 | 第25-26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-30页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第26页 |
| 2.2.2 试剂和仪器 | 第26-28页 |
| 2.2.3 常用培养基及溶液配制 | 第28-29页 |
| 2.2.4 实验引物 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-37页 |
| 2.3.1 扩增目的基因 | 第30页 |
| 2.3.2 gldh基因的T-A克隆 | 第30-31页 |
| 2.3.3 表达载体pET-Inp-gldh的构建 | 第31-32页 |
| 2.3.4 表达载体pET-Inp-gldh转化入E.coli BL21(DE3) | 第32-33页 |
| 2.3.5 重组蛋白INP-Gldh的诱导表达 | 第33页 |
| 2.3.6 SDS-PAGE分析融合蛋白INP-Gldh的表达定位 | 第33-34页 |
| 2.3.7 表面展示菌株的Gldh活性分析 | 第34-35页 |
| 2.3.8 His-tag对INP-Gldh在大肠杆菌中可溶性表达的影响 | 第35页 |
| 2.3.9 不同表达载体对INP-Gldh在大肠杆菌中可溶性表达的影响 | 第35-36页 |
| 2.3.10 不同表达菌株对INP-Gldh在大肠杆菌中可溶性表达的影响 | 第36-37页 |
| 2.4 结果与分析 | 第37-46页 |
| 2.4.1 质粒pET-Inp-gldh的构建 | 第37-40页 |
| 2.4.2 重组蛋白INP-Gldh的诱导表达、SDS-PAGE分析及酶活测定 | 第40-42页 |
| 2.4.3 His-tag对INP-Gldh在大肠杆菌中可溶性表达的影响 | 第42-44页 |
| 2.4.4 不同表达载体对INP-Gldh在大肠杆菌中可溶性表达的影响 | 第44-46页 |
| 2.4.5 不同表达菌株对INP-Gldh在大肠杆菌中可溶性表达的影响 | 第46页 |
| 2.5 本章小结 | 第46-48页 |
| 3 来自于T.waiotapuensis的谷氨酸脱氢酶在大肠杆菌表面展示系统的构建 | 第48-71页 |
| 3.1 实验材料 | 第48页 |
| 3.1.1 菌种与质粒 | 第48页 |
| 3.1.2 试剂和仪器 | 第48页 |
| 3.1.3 常用培养基和溶液 | 第48页 |
| 3.1.4 实验引物 | 第48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-56页 |
| 3.2.1 扩增目的基因 | 第48-49页 |
| 3.2.2 目的基因的T-A克隆 | 第49页 |
| 3.2.3 表达载体pTInaPb-N-Gldh的构建 | 第49-50页 |
| 3.2.4 表达载体pTInaPb-N-Gldh的转化及重组蛋白INP-Gldh的诱导表达 | 第50-51页 |
| 3.2.5 SDS-PAGE分析融合蛋白INP-Gldh的表达定位 | 第51-52页 |
| 3.2.6 表面展示菌株的Gldh活性分析 | 第52-53页 |
| 3.2.7 温度与pH对Gldh表面展示菌株酶活的影响 | 第53-54页 |
| 3.2.8 温度和pH对酶活稳定性的影响 | 第54页 |
| 3.2.9 底物特异性检测及米氏常数测定 | 第54-55页 |
| 3.2.10 各种离子对酶活的影响 | 第55页 |
| 3.2.11 细胞表面展示的Gldh检测L-谷氨酸 | 第55-56页 |
| 3.3 结果与分析 | 第56-70页 |
| 3.3.1 表达载体pTInaPb-N-Gldh的构建 | 第56-58页 |
| 3.3.2 融合蛋白INP-Gldh的诱导表达和SDS-PAGE分析 | 第58-60页 |
| 3.3.3 表面展示菌株的Gldh活性分析 | 第60-62页 |
| 3.3.4 Gldh表面展示菌株的最适温度和pH | 第62-63页 |
| 3.3.5 温度和pH对表面展示菌株酶活稳定性的影响 | 第63-65页 |
| 3.3.6 底物特异性和辅酶特异性检测 | 第65-67页 |
| 3.3.7 不同离子对酶活的影响 | 第67-68页 |
| 3.3.8 细胞表面展示的Gldh检测L-谷氨酸 | 第68-69页 |
| 3.3.9 谷氨酸实际样品的检测 | 第69-70页 |
| 3.4 本章小结 | 第70-71页 |
| 4 结论 | 第71-73页 |
| 5 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-83页 |
| 附录：符号说明及缩略词 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 作者简介及学术成果 | 第85页 |
