| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1 灰霉病及灰霉菌 | 第13-17页 |
| 1.1 灰霉病的症状及危害 | 第13页 |
| 1.2 灰霉病的生物学概况 | 第13-14页 |
| 1.3 灰霉病的发生规律 | 第14-15页 |
| 1.4 灰霉病的侵染及致病机制 | 第15页 |
| 1.5 灰霉病的防治 | 第15-17页 |
| 2 蛋白质的乙酰化修饰 | 第17-22页 |
| 2.1 蛋白乙酰化的概念及功能 | 第18-19页 |
| 2.2 乙酰化检测技术的发展 | 第19-20页 |
| 2.3 蛋白乙酰化的研究现状 | 第20-22页 |
| 3 本研究的目的及内容 | 第22-24页 |
| 3.1 研究目的及意义 | 第22页 |
| 3.2 研究内容 | 第22-23页 |
| 3.3 技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 灰霉菌乙酰化蛋白修饰分析 | 第24-43页 |
| 1. 材料与方法 | 第24-26页 |
| 1.1 试验材料 | 第24页 |
| 1.2 试验方法 | 第24-26页 |
| 1.2.1 样品处理 | 第24页 |
| 1.2.2 胰蛋白酶消化 | 第24-25页 |
| 1.2.3 乙酰化赖氨酸肽段富集 | 第25页 |
| 1.2.4 液相色谱—生物质谱联用分析 | 第25页 |
| 1.2.5 数据分析 | 第25-26页 |
| 1.2.6 生物信息学分析 | 第26页 |
| 2 结果与分析 | 第26-41页 |
| 2.1 灰霉赖氨酸乙酰化蛋白及位点分析 | 第26-27页 |
| 2.2 灰霉赖氨酸乙酰化蛋白质组的特性分析 | 第27-34页 |
| 2.3 灰霉赖氨酸乙酰化位点分布及结构分析 | 第34-37页 |
| 2.4 灰霉菌赖氨酸乙酰化蛋白互作网络分析 | 第37-40页 |
| 2.5 灰霉菌中与致病性相关乙酰化蛋白的分析 | 第40-41页 |
| 3 小结与讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 致病性相关乙酰化蛋白BcYak1的功能分析 | 第43-73页 |
| 1 材料与方法 | 第43-56页 |
| 1.1 试验材料 | 第43-48页 |
| 1.1.1 供试材料和质粒 | 第43页 |
| 1.1.2 主要试剂及配制 | 第43-44页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第44-45页 |
| 1.1.4 培养基及配方 | 第45-47页 |
| 1.1.5 引物 | 第47-48页 |
| 1.2 试验方法 | 第48-56页 |
| 1.2.1 灰霉菌的培养及保存 | 第48页 |
| 1.2.2 灰霉菌基因组DNA的提取 | 第48-49页 |
| 1.2.3 PCR技术 | 第49-50页 |
| 1.2.4 DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第50页 |
| 1.2.5 PCR产物纯化 | 第50-51页 |
| 1.2.6 DNA克隆技术 | 第51页 |
| 1.2.7 E. Coli DH5α感受态细胞的制备及转化 | 第51-53页 |
| 1.2.8 重组质粒的鉴定与提取 | 第53-54页 |
| 1.2.9 质粒酶切 | 第54页 |
| 1.2.10 灰霉菌的原生质体转化 | 第54-55页 |
| 1.2.11 酵母热激转化 | 第55-56页 |
| 1.3 数据处理分析 | 第56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-71页 |
| 2.1 灰霉菌BcYak1基因的生物信息学分析 | 第56-59页 |
| 2.2 灰霉菌BcYak1基因敲除及△BcYak1突变体的获得 | 第59-60页 |
| 2.3 △BcYak1变体的回补及转化子鉴定 | 第60-61页 |
| 2.4 突变体表型分析 | 第61-67页 |
| 2.4.1 生长速率 | 第61-62页 |
| 2.4.2 产孢量测定 | 第62-63页 |
| 2.4.3 菌核产生测定 | 第63-64页 |
| 2.4.4 对胁迫压力敏感性 | 第64-66页 |
| 2.4.5 致病性测定 | 第66-67页 |
| 2.5 乙酰化位点的功能分析 | 第67-69页 |
| 2.6 蛋白亚细胞定位的研究 | 第69-71页 |
| 3 小结与讨论 | 第71-73页 |
| 第四章 全文总结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
| 导师组意见 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 作者简历 | 第81-82页 |
| 硕士期间科研学术成果 | 第82页 |
