| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 豆类重要植物病原细菌简述 | 第11-12页 |
| 1.1.1 菜豆细菌性萎蔫病菌 | 第11页 |
| 1.1.2 菜豆晕疫病菌 | 第11-12页 |
| 1.1.3 菜豆普通细菌性疫病菌 | 第12页 |
| 1.1.4 豌豆细菌性疫病菌 | 第12页 |
| 1.2 豆类植物病原细菌检测方法研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.1 传统检测方法 | 第12-13页 |
| 1.2.2 血清学检测方法 | 第13页 |
| 1.2.3 分子生物学法 | 第13-14页 |
| 1.3 基于锁式探针的滚环扩增检测技术 | 第14-17页 |
| 1.3.1 基本技术原理 | 第14-16页 |
| 1.3.2 滚环扩增技术的应用 | 第16-17页 |
| 1.3.3 滚环扩增技术优势 | 第17页 |
| 1.4 液相悬浮芯片检测技术 | 第17-18页 |
| 1.4.1 基本技术原理 | 第17-18页 |
| 1.4.2 液相芯片技术的应用 | 第18页 |
| 1.4.3 液相芯片技术优势 | 第18页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-42页 |
| 2.1 材料 | 第20-28页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第20-26页 |
| 2.1.2 主要试剂及培养基 | 第26页 |
| 2.1.3 主要溶液 | 第26-27页 |
| 2.1.4 主要仪器及设备 | 第27-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-42页 |
| 2.2.1 细菌培养 | 第28页 |
| 2.2.2 核酸提取 | 第28页 |
| 2.2.3 引物及探针设计合成 | 第28-30页 |
| 2.2.4 常规PCR引物的选取及合成 | 第30-31页 |
| 2.2.5 滚环扩增检测体系优化及建立 | 第31-32页 |
| 2.2.6 PSPI滚环扩增检测方法建立 | 第32页 |
| 2.2.7 PSPH滚环扩增检测方法建立 | 第32-33页 |
| 2.2.8 CFF滚环扩增检测方法建立 | 第33页 |
| 2.2.9 XCP滚环扩增检测方法建立 | 第33-34页 |
| 2.2.10 捕获探针与微球偶联 | 第34-36页 |
| 2.2.11 探针偶联效率验证 | 第36-38页 |
| 2.2.12 杂交及检测 | 第38页 |
| 2.2.13 液相检测结果判定 | 第38-39页 |
| 2.2.14 液相悬浮芯片杂交条件优化 | 第39页 |
| 2.2.15 捕获探针特异性验证 | 第39页 |
| 2.2.16 单重滚环扩增产物的液相芯片检测 | 第39页 |
| 2.2.17 PSPI、PSPH、XCP、CFF四重滚环扩增体系建立 | 第39-40页 |
| 2.2.18 PSPI、PSPH、XCP、CFF四重液相芯片检测体系建立 | 第40页 |
| 2.2.19 四重液相芯片检测体系特异性 | 第40页 |
| 2.2.20 四重液相芯片检测体系灵敏度 | 第40页 |
| 2.2.21 四重液相芯片检测体系重复性 | 第40-41页 |
| 2.2.22 系列梯度浓度的纯菌悬液混合健康种子浸泡液检测 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-62页 |
| 3.1 滚环扩增检测体系的优化和建立 | 第42-45页 |
| 3.2 PSPI、PSPH、CFF、XCP单重滚环扩增检测方法建立 | 第45-50页 |
| 3.2.1 PSPI滚环扩增检测方法建立 | 第45-46页 |
| 3.2.2 PSPH滚环扩增检测方法建立 | 第46-48页 |
| 3.2.3 CFF滚环扩增检测方法建立 | 第48-49页 |
| 3.2.4 XCP滚环扩增检测方法建立 | 第49-50页 |
| 3.3 捕获探针与微球偶联效率验证 | 第50-51页 |
| 3.4 PSPI、PSPH、XCP、CFF四重液相悬浮芯片检测体系建立 | 第51-59页 |
| 3.4.1 液相芯片杂交条件优化 | 第51-53页 |
| 3.4.2 液相悬浮芯片检测杂交体系的确立 | 第53页 |
| 3.4.3 捕获探针特异性验证 | 第53-54页 |
| 3.4.4 液相芯片对4种单重滚环扩增产物检测 | 第54-55页 |
| 3.4.5 四重液相悬浮芯片检测体系特异性 | 第55-56页 |
| 3.4.6 四重液相悬浮芯片检测体系灵敏度 | 第56-58页 |
| 3.4.7 四重液相悬浮芯片检测体系重复性 | 第58-59页 |
| 3.5 系列梯度浓度的纯菌悬液混合健康种子浸泡液检测 | 第59-62页 |
| 4. 结论与讨论 | 第62-67页 |
| 4.1 结论 | 第62页 |
| 4.2 讨论 | 第62-65页 |
| 4.2.1 锁式探针设计原则 | 第62-63页 |
| 4.2.2 滚环扩增体系的优化 | 第63页 |
| 4.2.3 滚环扩增污染问题 | 第63-64页 |
| 4.2.4 环化探针扩增方式的选择 | 第64页 |
| 4.2.5 扩增产物的大小对液相芯片检测的影响 | 第64-65页 |
| 4.2.6 杂质及抑制物对锁式探针的干扰 | 第65页 |
| 4.2.7 豆类4种重要细菌的单重和四重检测应用评价 | 第65页 |
| 4.3 问题和展望 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 附录 | 第74页 |
