| 论文创新点 | 第5-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-34页 |
| 1 凝集素 | 第17-24页 |
| 1.1 凝集素的发现与定义 | 第17-18页 |
| 1.2 凝集素的结构分类 | 第18-19页 |
| 1.3 凝集素糖结合特异性的研究方法 | 第19-20页 |
| 1.4 凝集素的生物学活性 | 第20-23页 |
| 1.5 凝集素的应用 | 第23-24页 |
| 2 巨噬细胞功能极化的研究 | 第24-27页 |
| 2.1 巨噬细胞的极化 | 第24-26页 |
| 2.2 巨噬细胞极化与肿瘤发展的关系 | 第26-27页 |
| 3 蛋白质翻译后O-GlcNAc糖基化修饰的研究 | 第27-34页 |
| 3.1 O-GlcNAc修饰的发现与定义 | 第27-28页 |
| 3.2 蛋白质O-GlcNAc与疾病的关系 | 第28-30页 |
| 3.3 蛋白质O-GlcNAc修饰的富集及鉴定 | 第30-34页 |
| 第二章 一种北虫草来源的新型凝集素CMIP的分离纯化与克隆表达 | 第34-49页 |
| 1 引言 | 第34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-42页 |
| 2.1 北虫草(Cordeceps militaris)总蛋白的提取 | 第34-35页 |
| 2.2 北虫草来源的凝集素CMIP的分离纯化 | 第35页 |
| 2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测 | 第35页 |
| 2.4 胶内酶解及CMIP蛋白LC-MS/MS质谱鉴定 | 第35-36页 |
| 2.5 圆二色谱检测 | 第36页 |
| 2.6 CMIP的克隆与原核表达 | 第36-41页 |
| 2.7 CMIP凝血检测 | 第41-42页 |
| 3 实验结果 | 第42-47页 |
| 3.1 CMIP蛋白的天然纯化 | 第42页 |
| 3.2 CMIP的蛋白序列以及编码基因鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3 CMIP二级结构的圆二色谱分析 | 第43-44页 |
| 3.4 CMIP的蛋白编码基因的优化合成,克隆,原核表达以及纯化 | 第44-45页 |
| 3.5 CMIP凝血活性 | 第45-47页 |
| 4 结果讨论 | 第47-48页 |
| 4.1 CMIP的天然纯化与原核表达 | 第47页 |
| 4.2 CMIP的结构组成 | 第47页 |
| 4.3 CMIP的凝血特异性 | 第47-48页 |
| 5. 本章总结 | 第48-49页 |
| 第三章 凝集素CMIP生物活性研究——糖结合特异性、免疫调节及抗肿瘤活性 | 第49-73页 |
| 1 引言 | 第49页 |
| 2 材料与方法 | 第49-57页 |
| 2.1 CMIP糖结合特异性CFG糖芯片测定 | 第49-50页 |
| 2.2 CMIP与细胞结合流式检测 | 第50页 |
| 2.3 凝集素-细胞结合竞争抑制实验 | 第50-51页 |
| 2.4 腹腔巨噬细胞的分离 | 第51页 |
| 2.5 脾脏淋巴细胞的分离 | 第51页 |
| 2.6 人外周血淋巴细胞的分离 | 第51页 |
| 2.7 CMIP与人外周血淋巴细胞的结合流式检测 | 第51-52页 |
| 2.8 CMIP刺激小鼠脾脏淋巴细胞增殖 | 第52页 |
| 2.9 CMIP的细胞毒性检测 | 第52页 |
| 2.10 巨噬细胞CMIP处理的条件培养基的细胞毒性 | 第52-53页 |
| 2.11 荧光定量PCR检测 | 第53-55页 |
| 2.12 流式细胞仪检测巨噬细胞细胞表面CD86的表达 | 第55页 |
| 2.13 蛋白免疫印记 | 第55-56页 |
| 2.14 4T1乳腺癌细胞肺部转移模型的建立 | 第56页 |
| 2.15 肺部组织苏木精伊红染色 | 第56-57页 |
| 3 实验结果 | 第57-69页 |
| 3.1 CMIP的糖结合特异性 | 第57-61页 |
| 3.2 CMIP的免疫调节活性 | 第61-67页 |
| 3.3 CMIP的抗肿瘤活性 | 第67-69页 |
| 4 结果讨论 | 第69-72页 |
| 4.1 CMIP糖结合特性以及其应用前景 | 第69-70页 |
| 4.2 CMIP的免疫调节活性 | 第70页 |
| 4.3 CMIP抗肿瘤效果 | 第70-72页 |
| 5. 本章小结 | 第72-73页 |
| 第四章 北虫草活性蛋白CMCL和CMRBL的初步研究 | 第73-86页 |
| 1 引言 | 第73页 |
| 2. 材料与方法 | 第73-77页 |
| 2.1 虫草活性蛋白CMCL与CMRBL的克隆与原核表达 | 第73-76页 |
| 2.2 CMCL与CMRBL凝血检测 | 第76页 |
| 2.3 小鼠脾脏淋巴细胞的分离 | 第76页 |
| 2.4 CMCL与CMRBL刺激小鼠脾脏淋巴细胞增殖检测 | 第76页 |
| 2.5 CMCL与CMRBL的细胞毒性 | 第76-77页 |
| 3. 实验结果 | 第77-83页 |
| 3.1 两种候选凝集素CMCL与CMRBL的克隆与原核表达 | 第77-79页 |
| 3.2 CMCL与CMRBL的凝血活性 | 第79-80页 |
| 3.3 CMCL与CMRBL刺激淋巴细胞的增殖 | 第80-81页 |
| 3.4 CMCL与CMRBL对肿瘤细胞的细胞毒性 | 第81-83页 |
| 4. 结果讨论 | 第83-85页 |
| 4.1 克隆以及原核表达基因的选择 | 第83页 |
| 4.2 CMCL的生物学活性研究 | 第83页 |
| 4.3 CMRBL的生物学活性研究 | 第83-85页 |
| 5 本章小结 | 第85-86页 |
| 第五章 凝集素Di-AAL2与HCD/ETD-LC-MS/MS联合应用于蛋白O-GlcNAc修饰的鉴定 | 第86-105页 |
| 1 引言 | 第86页 |
| 2 材料与方法 | 第86-93页 |
| 2.1 成肌细胞的诱导分化 | 第86-87页 |
| 2.2 Q-PCR检测肌肉细胞的分化 | 第87页 |
| 2.3 胰岛素以及棕榈酸的配制 | 第87-88页 |
| 2.4 肌肉细胞胰岛素敏感与耐受模型的建立 | 第88页 |
| 2.5 葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定葡萄糖吸收 | 第88页 |
| 2.6 糖尿病大鼠模型的建立 | 第88页 |
| 2.7 大鼠组织总蛋白的提取 | 第88-89页 |
| 2.8 POROS与Di-AAL2偶联填料的制备 | 第89页 |
| 2.9 蛋白的Trypsin降解 | 第89-90页 |
| 2.10 酶解肽段脱盐 | 第90页 |
| 2.11 PNGase F酶切蛋白N-link的糖修饰 | 第90-91页 |
| 2.12 凝集素去除N-link修饰肽段 | 第91页 |
| 2.13 POROS AL-Di-AAL2层析富集大鼠组织O-GlcNAc修饰肽段 | 第91页 |
| 2.14 O-GlcNAc修饰肽段CTD110.6抗体超滤管富集 | 第91-92页 |
| 2.15 LC-MS/MS质谱鉴定肽段O-GlcNAc修饰 | 第92页 |
| 2.16 免疫沉淀 | 第92-93页 |
| 3. 实验结果 | 第93-102页 |
| 3.1 成肌细胞的分化 | 第93页 |
| 3.2 胰岛素敏感与胰岛素耐受细胞葡萄糖吸收的检测 | 第93-94页 |
| 3.3 肌肉细胞胰岛素敏感以及胰岛素耐受蛋白O-GlcANc修饰的变化 | 第94-95页 |
| 3.4 Di-AAL2富集糖尿病大鼠组织中O-GlcNAc修饰蛋白 | 第95-100页 |
| 3.5 质谱鉴定O-GlcNAc蛋白的蛋白免疫验证 | 第100-102页 |
| 4. 结果讨论 | 第102-104页 |
| 4.1 蛋白质O-GlcNAc修饰与糖尿病的关系 | 第102页 |
| 4.2 Di-AAL2用于蛋白质O-GlcNAc修饰的应用前景 | 第102-104页 |
| 5. 本章小结 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-120页 |
| 在读期间发表及投稿论文 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
