| Abstract | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第7-11页 |
| Chapter 1 Introduction | 第11-31页 |
| 1.1 Lipase | 第11-13页 |
| 1.1.1 Lipase sources | 第11-12页 |
| 1.1.2 Applications of Microbial Lipases | 第12-13页 |
| 1.2 Bacillus subtillis spore surface display | 第13-27页 |
| 1.2.1 Background | 第13-15页 |
| 1.2.2 Bacillus subtilis | 第15页 |
| 1.2.3 Spores | 第15-17页 |
| 1.2.4 Nutritive cells | 第17-19页 |
| 1.2.4.1 Yeast surface display | 第17页 |
| 1.2.4.2 Bacterial surface display | 第17-19页 |
| 1.2.5 Spore surface display (stress tolerance: high temperature, p H, organic solventresistance, GRAS) | 第19-21页 |
| 1.2.6 Vectors for spore surface display | 第21-24页 |
| 1.2.7 Applications (Vaccine, Antigen, antibody, pharmaceutical protein) | 第24-27页 |
| 1.2.7.1 Vaccine development | 第24页 |
| 1.2.7.2 Environment | 第24-26页 |
| 1.2.7.3 Enzyme immobilization/Biocatalysis (industrial enzymes under harsh or badenvironment) | 第26页 |
| 1.2.7.4 Peptide libraries | 第26-27页 |
| 1.2.8 Limitations | 第27页 |
| 1.3 Linkers | 第27-29页 |
| 1.4 Aim of the study | 第29-30页 |
| 1.5 Significance of the study | 第30页 |
| 1.6 Practical route of the study | 第30-31页 |
| Chapter 2 Effect of Linkers on Lipase Tm1350 Activity | 第31-58页 |
| 2.1 Background | 第31-32页 |
| 2.2 Materials used in the study | 第32-39页 |
| 2.2.1 Bacterial Strain and vectors | 第32-33页 |
| 2.2.2 Chemical reagents, and antiserum | 第33-34页 |
| 2.2.3 Biological buffer/other solutions | 第34-37页 |
| 2.2.4 Nutrient medium used in the study | 第37-38页 |
| 2.2.5 Preparation of agarose and SDS-PAGE gel | 第38-39页 |
| 2.3 Experimental methods | 第39-46页 |
| 2.3.1 Recombinant Plasmid Construction with various peptide linkers | 第39-41页 |
| 2.3.2 Preparation of E. coli competent cells | 第41-42页 |
| 2.3.3 Transformation to E. coli | 第42页 |
| 2.3.4 Plasmid extraction | 第42-43页 |
| 2.3.5 Preparation of Bacillus subtilis competent cells | 第43页 |
| 2.3.6 Transformation to B. subtilis and Preparation of Recombinant Spores | 第43页 |
| 2.3.7 Western blotting | 第43-44页 |
| 2.3.8 Enzyme Activity Assay | 第44-46页 |
| 2.4 Results | 第46-55页 |
| 2.4.1 Construction of recombinant plasmid with different linkers | 第46-47页 |
| 2.4.2 Expression of Cot B-Tm1350 on spore surface by western blot analysis | 第47页 |
| 2.4.3 Confirmation of Cot B-Tm1350 displayed on spore surface using differentsolvents | 第47-52页 |
| 2.4.4 Optimum temperature and thermostabilty of spores surface displayedTm1350 | 第52-54页 |
| 2.4.5 Effect of p H on spores surface displayed Tm1350 | 第54-55页 |
| 2.5 Discussion | 第55-58页 |
| Chapter 3 Conclusion and future perspectives | 第58-60页 |
| References | 第60-74页 |
| Acknowledgements | 第74-75页 |
| Publications | 第75页 |
