| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 1 前言 | 第14-28页 |
| 1.1 课题的提出 | 第14页 |
| 1.2 文献综述 | 第14-26页 |
| 1.2.1 花香成分的分析方法 | 第14-16页 |
| 1.2.2 花香挥发物的生物合成 | 第16-17页 |
| 1.2.3 花香相关的基因 | 第17-23页 |
| 1.2.4 花香产物的调控 | 第23-24页 |
| 1.2.5 花香代谢工程 | 第24-26页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 2 不同蜡梅克隆的花香成分分析 | 第28-35页 |
| 2.1 前言 | 第28-29页 |
| 2.2 材料与方法 | 第29-30页 |
| 2.2.1 植物材料与仪器 | 第29-30页 |
| 2.2.2 HS-SPME取样 | 第30页 |
| 2.2.3 GC/MS分析 | 第30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-32页 |
| 2.3.1 6个克隆的花香成分分析 | 第30-32页 |
| 2.3.3 不同花器官的花香成分分析 | 第32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-35页 |
| 3 蜡梅水杨酸羧基位甲基转移酶(CpSAMT)基因的克隆及鉴定 | 第35-72页 |
| 3.1 前言 | 第35-37页 |
| 3.1.1 花香中的水杨酸甲酯 | 第35页 |
| 3.1.2 植物营养组织中水杨酸甲酯的诱导和散发以及植物-昆虫的化学通讯 | 第35-37页 |
| 3.2 材料与方法 | 第37-53页 |
| 3.2.1 植物材料、菌株、质粒、主要试剂及仪器 | 第37-38页 |
| 3.2.2 蜡梅水杨酸羧基位甲基转移酶(CpSAMT)基因的克隆 | 第38-45页 |
| 3.2.2.1 蜡梅花总RNA提取和检测 | 第38-39页 |
| 3.2.2.2 RT-PCR扩增CpSAMT基因片段 | 第39-41页 |
| 3.2.2.3 CpSAMT基因片断的克隆 | 第41-42页 |
| 3.2.2.4 CpSAMT基因cDNA末端的扩增 | 第42-44页 |
| 3.2.2.5 CpSAMT基因全长cDNA的获得 | 第44-45页 |
| 3.2.3 CpSAMT基因的生物信息学分析 | 第45-46页 |
| 3.2.4 CpSAMT基因的时空表达分析 | 第46-47页 |
| 3.2.4.1 材料的处理 | 第46页 |
| 3.2.4.2 Real-time PCR引物设计 | 第46页 |
| 3.2.4.3 总RNA的提取和消化以及反转录 | 第46-47页 |
| 3.2.4.4 Real-time PCR反应体系及反应程序 | 第47页 |
| 3.2.5 CpSAMT基因的原核表达与功能分析 | 第47-52页 |
| 3.2.5.1 原核表达载体的构建(以PET-32a(+)载体为例) | 第47-49页 |
| 3.2.5.2 重组蛋白的表达 | 第49-51页 |
| 3.2.5.3 重组蛋白纯化 | 第51页 |
| 3.2.5.4 Bradford法测定蛋白质含量 | 第51-52页 |
| 3.2.5.5 重组蛋白SAMT的产物分析 | 第52页 |
| 3.2.6 蜡梅花水杨酸羧基位甲基转移酶活性分析 | 第52-53页 |
| 3.2.6.1 SAMT粗酶液的提取 | 第52-53页 |
| 3.2.6.2 SAMT的活性测定 | 第53页 |
| 3.3 结果与分析 | 第53-68页 |
| 3.3.1 CpSAMT基因cDNA全长的克隆 | 第53-54页 |
| 3.3.2 CpSAMT基因的cDNA序列结构特征 | 第54-56页 |
| 3.3.3 CpSAMT基因编码蛋白性质分析 | 第56-62页 |
| 3.3.3.1 CpSAMT基因编码蛋白保守域预测 | 第56页 |
| 3.3.3.2 CpSAMT基因编码蛋白多序列比对和进化树分析 | 第56-60页 |
| 3.3.3.3 CpSAMT基因编码蛋白基本性质 | 第60-61页 |
| 3.3.3.4 CpSAMT基因编码蛋白三级结构预测 | 第61-62页 |
| 3.3.4 CpSAMT基因的表达情况 | 第62-63页 |
| 3.3.5 CpSAMT原核表达载体的构建和表达分析 | 第63-67页 |
| 3.3.5.1 表达质粒PET-32a(+)-CpSAMT的构建 | 第63-64页 |
| 3.3.5.2 重组蛋白表达与SDS-PAGE分析 | 第64-66页 |
| 3.3.5.3 重组蛋白SAMT的产物分析 | 第66-67页 |
| 3.3.6 蜡梅花的SAMT酶活性 | 第67-68页 |
| 3.3.6.1 水杨酸甲酯标准分析回归方程 | 第67页 |
| 3.3.6.2 各个时期蜡梅花的SAMT酶活性 | 第67-68页 |
| 3.3.6.3 蜡梅花各部位的SAMT酶活性 | 第68页 |
| 3.4 讨论 | 第68-72页 |
| 3.4.1 CpSAMT基因序列特征 | 第68-70页 |
| 3.4.2 CpSAMT基因的异源表达 | 第70页 |
| 3.4.3 CpSAMT基因在蜡梅花中时间和空间的表达以及酶活性变化 | 第70-71页 |
| 3.4.4 SAMT基因在伤处理叶片中的表达 | 第71-72页 |
| 4 蜡梅法呢基焦磷酸酯合成酶(CpFPPS)基因的克隆与鉴定 | 第72-91页 |
| 4.1 前言 | 第72-73页 |
| 4.2 材料与方法 | 第73-77页 |
| 4.2.1 植物材料、菌株、质粒、主要试剂及仪器 | 第73页 |
| 4.2.2 蜡梅法呢基焦磷酸酯合成酶(CpFPPS)基因的克隆 | 第73-74页 |
| 4.2.2.1 RT-PCR扩增CpFPPS基因片段 | 第73页 |
| 4.2.2.2 CpFPPS基因cDNA末端的扩增 | 第73-74页 |
| 4.2.2.3 CpFPPS基因全长cDNA的获得 | 第74页 |
| 4.2.3 CpFPPS基因的生物信息学分析 | 第74页 |
| 4.2.4 CpFPPS基因的时空表达分析 | 第74-75页 |
| 4.2.5 CpFPPS基因的原核表达与功能分析 | 第75-77页 |
| 4.2.5.1 表达质粒pCold TF-CpFPPS构建 | 第75页 |
| 4.2.5.2 重组蛋白的表达 | 第75-76页 |
| 4.2.5.3 重组蛋白纯化 | 第76-77页 |
| 4.2.5.4 重组蛋白FPPS的产物分析 | 第77页 |
| 4.3 结果与分析 | 第77-88页 |
| 4.3.1 CpFPPS基因cDNA全长的克隆 | 第77-78页 |
| 4.3.2 CpFPPS基因的cDNA序列结构特征 | 第78-79页 |
| 4.3.3 CpFPPS基因编码蛋白性质分析 | 第79-84页 |
| 4.3.3.1 CpFPPS基因编码蛋白保守域预测 | 第79-80页 |
| 4.3.3.2 CpFPPS基因编码蛋白多序列比对和进化树分析 | 第80-82页 |
| 4.3.3.3 CpFPPS基因编码蛋白基本性质 | 第82-83页 |
| 4.3.3.4 CpFPPS基因编码蛋白三级结构预测 | 第83-84页 |
| 4.3.4 CpFPPS基因的表达情况 | 第84-85页 |
| 4.3.5 CpFPPS的原核表达载体构建和表达分析 | 第85-88页 |
| 4.3.5.1 原核表达载体的构建 | 第85-86页 |
| 4.3.5.2 重组蛋白表达与SDS-PAGE分析 | 第86-87页 |
| 4.3.5.3 重组蛋白FPPS的产物分析 | 第87-88页 |
| 4.4 讨论 | 第88-91页 |
| 4.4.1 CpFPPS基因序列特征 | 第88-89页 |
| 4.4.2 CpFPPS基因亚细胞定位预测 | 第89页 |
| 4.4.3 CpFPPS基因在蜡梅花中的空间和时间的表达 | 第89-91页 |
| 5 展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 附录一:发表或待发表文章 | 第104-105页 |
| 附录二:登记基因信息 | 第105-109页 |
