| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 1. 前言 | 第14-25页 |
| 1.1 杆状病毒简介 | 第14-18页 |
| 1.1.1 杆状病毒的形态与结构 | 第14-16页 |
| 1.1.2 杆状病毒的生活周期 | 第16-17页 |
| 1.1.3 杆状病毒的分类 | 第17页 |
| 1.1.4 核心基因 | 第17-18页 |
| 1.2 相关研究现状 | 第18-20页 |
| 1.2.1 BV/ODV-C42(p40)研究现状 | 第18-19页 |
| 1.2.2 p49(Ac142)研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3 蛋白质相互作用研究 | 第20-23页 |
| 1.3.1 酵母双杂交技术 | 第20-21页 |
| 1.3.2 免疫共沉淀技术 | 第21-22页 |
| 1.3.3 双分子荧光互补技术 | 第22-23页 |
| 1.3.4 Pull-down实验 | 第23页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第23-25页 |
| 2. 实验材料和仪器 | 第25-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-31页 |
| 2.1.1 菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 病毒及细胞系 | 第25页 |
| 2.1.3 引物与载体 | 第25-26页 |
| 2.1.4 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.5 酶、抗生素、化学试剂和试剂盒 | 第27-31页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第31-33页 |
| 3. 实验方法和步骤 | 第33-48页 |
| 3.1 重组质粒构建 | 第33-36页 |
| 3.1.1 引物设计 | 第33页 |
| 3.1.2 PCR扩增目的片段 | 第33-34页 |
| 3.1.3 回收DNA片段 | 第34页 |
| 3.1.4 酶切 | 第34页 |
| 3.1.5 酶连 | 第34-35页 |
| 3.1.6 Ca~(2+)化学转化感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 3.1.7 连接产物或质粒的转化 | 第35页 |
| 3.1.8 碱裂解法小量提取大肠杆菌质粒DNA | 第35-36页 |
| 3.2 酵母双杂交实验 | 第36-41页 |
| 3.2.1 检测基因的自激活作用 | 第36-38页 |
| 3.2.2 检测基因对酵母菌株的毒性 | 第38页 |
| 3.2.3 与cDNA文库杂交 | 第38-40页 |
| 3.2.4 显色反应筛选相互作用蛋白 | 第40页 |
| 3.2.5 检测阳性克隆 | 第40-41页 |
| 3.2.6 回交实验 | 第41页 |
| 3.2.7 测序及生物信息学分析 | 第41页 |
| 3.3 蛋白质原核表达 | 第41-44页 |
| 3.3.1 目的蛋白的原核表达 | 第41-42页 |
| 3.3.2 目的蛋白的可溶性分析 | 第42-43页 |
| 3.3.3 His标签融合蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| 3.4 多克隆抗体的制备 | 第44页 |
| 3.5 非特异性抗体的中和 | 第44-45页 |
| 3.6 蛋白免疫印迹(western blot) | 第45-46页 |
| 3.7 细胞转染 | 第46页 |
| 3.8 细胞感染 | 第46-47页 |
| 3.9 免疫共沉淀实验 | 第47-48页 |
| 4 实验结果 | 第48-77页 |
| 4.1 与AcMNPVP40相互作用的Sf9细胞蛋白基因的筛选 | 第48-57页 |
| 4.1.1 诱饵载体pGBKT7-p40的构建 | 第48-49页 |
| 4.1.2 BD-P40融合蛋白的白激活检测和细胞毒性检测 | 第49页 |
| 4.1.3 与P40蛋白相互作用的Sf蛋白的cDNA克隆的筛选和鉴定 | 第49-57页 |
| 4.2 从AcMNPV感染18h的cDNA文库中筛选与AcMNPV P40互作用的蛋白基因 | 第57-60页 |
| 4.2.1 与AcMNPV感染18h的cDNA文库杂交 | 第57页 |
| 4.2.2 与P40蛋白相互作用的蛋白的cDNA克隆的筛选和鉴定 | 第57-60页 |
| 4.3 P40的原核表达和多克隆抗体制备 | 第60-63页 |
| 4.3.1 P40的原核表达 | 第60-62页 |
| 4.3.2 AcMNPV P40多克隆抗体的制备及非特异性His标签抗体的中和· | 第62-63页 |
| 4.4、P40在AcMNPV感染的Sf9细胞中的表达时相分析 | 第63-64页 |
| 4.5 核糖体蛋白L41(RL41)的原核表达和多克隆抗体制备 | 第64-66页 |
| 4.5.1 RL41-His融合蛋白的原核表达 | 第64-65页 |
| 4.5.2 RL41多克隆抗体的制备及检测 | 第65-66页 |
| 4.6 AcMNPV P40与RL41之间免疫共沉淀分析 | 第66-67页 |
| 4.7 AcMNPV P40与P21之间免疫共沉淀分析 | 第67页 |
| 4.8 与AcMNPV P49相互作用的Sf9细胞蛋白基因的筛选 | 第67-77页 |
| 4.8.1 诱饵载体pGBKT7-p49的构建 | 第67-68页 |
| 4.8.2 BD-P49融合蛋白的自激活检测和毒性检测 | 第68-69页 |
| 4.8.3 与P49蛋白相互作用的Sf蛋白的cDNA克隆的筛选和鉴定 | 第69-77页 |
| 5、讨论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 在校期间发表的论文 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
