甘蓝型油菜线粒体未知基因的克隆与功能分析
| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 主要符号表 | 第13-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-24页 |
| 1.1 线粒体的结构和功能 | 第14-16页 |
| 1.1.1 线粒体的结构 | 第14页 |
| 1.1.2 线粒体的功能研究 | 第14-16页 |
| 1.2 线粒体基因组的研究进展 | 第16-21页 |
| 1.2.1 高等植物线粒体基因组特点 | 第16-17页 |
| 1.2.2 高等植物线粒体功能基因研究进展 | 第17-20页 |
| 1.2.3 线粒体基因功能研究的方法 | 第20-21页 |
| 1.3 我国油菜发展现状 | 第21-23页 |
| 1.3.1 我国菜籽油消费现状 | 第21-22页 |
| 1.3.2 我国油菜生产现状 | 第22-23页 |
| 1.4 本研究的意义 | 第23-24页 |
| 第2章 材料与方法 | 第24-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 菌株材料 | 第24页 |
| 2.1.3 药品试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 试剂配方 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 植物基因组的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 植物总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.3 逆转录合成cDNA | 第27页 |
| 2.2.4 质粒的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.5 目的片段的纯化回收 | 第28页 |
| 2.2.6 目的片段的切胶回收 | 第28-29页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第29页 |
| 2.2.9 农杆菌感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.10 农杆菌感受态细胞的转化 | 第30页 |
| 2.2.11 拟南芥种植 | 第30-31页 |
| 2.2.12 ATP合成酶酶活检测 | 第31页 |
| 2.2.13 ATP含量检测 | 第31-32页 |
| 2.3 技术路线 | 第32-43页 |
| 2.3.1 基因组比对与基因序列分析 | 第32-33页 |
| 2.3.2 载体构建与转化 | 第33-39页 |
| 2.3.3 拟南芥的转化与筛选 | 第39页 |
| 2.3.4 GFP蛋白的线粒体定位观察 | 第39-40页 |
| 2.3.5 定量检测转基因材料表达量 | 第40-41页 |
| 2.3.6 生理生化检测转基因材料 | 第41-43页 |
| 第3章 结果与分析 | 第43-66页 |
| 3.0 确定功能未知的线粒体基因14个 | 第43页 |
| 3.1 基因序列分析 | 第43-47页 |
| 3.2 转运肽将GFP蛋白定位于线粒体 | 第47-51页 |
| 3.2.1 转运肽序列的扩增及分析 | 第47-48页 |
| 3.2.2 GFP基因的扩增及分析 | 第48-49页 |
| 3.2.3 融合基因的扩增及分析 | 第49页 |
| 3.2.4 植物表达载体的构建、转化与分析 | 第49-50页 |
| 3.2.5 转GFP拟南芥共定位分析 | 第50-51页 |
| 3.3 目的基因在转基因拟南芥中得到高效表达 | 第51-54页 |
| 3.3.1 基因的克隆融合与转基因拟南芥的获得 | 第51-53页 |
| 3.3.2 目的基因在转基因材料中高效过表达 | 第53-54页 |
| 3.4 候选基因功能分析 | 第54-64页 |
| 3.4.1 ORF188基因功能鉴定与分析 | 第54-59页 |
| 3.4.2 其他基因功能鉴定与分析 | 第59-61页 |
| 3.4.3 特殊株型鉴定 | 第61-64页 |
| 3.6 总结及展望 | 第64-66页 |
| 3.6.1 总结 | 第64-65页 |
| 3.6.2 展望 | 第65-66页 |
| 第4章 讨论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简介 | 第77页 |
