| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-21页 |
| 1 拟除虫菊酯类农药的危害 | 第13页 |
| 2 拟除虫菊酯类农药生物降解的研究 | 第13-17页 |
| 2.1 拟除虫菊酯类杀虫剂降解菌的研究 | 第14-15页 |
| 2.2 拟除虫菊酯类杀虫剂降解酶的研究 | 第15页 |
| 2.3 Sphingobium wenxiniae JZ-1中的菊酯水解酶(PytH) | 第15-17页 |
| 3 蛋白质晶体学简介 | 第17-21页 |
| 3.1 高质量蛋白质晶体的获得 | 第18页 |
| 3.1.1 蛋白质晶体的生长 | 第18页 |
| 3.1.2 蛋白质晶体质量的提高 | 第18页 |
| 3.2 相位的测定 | 第18-21页 |
| 第一章 菊酯水解酶PytH基因的表达、蛋白纯化、酶活性的检测及稳定性研究 | 第21-37页 |
| 1.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 1.1.1 质粒及宿主菌 | 第21页 |
| 1.1.2 引物 | 第21-22页 |
| 1.1.3 培养基 | 第22页 |
| 1.1.4 酶和试剂 | 第22页 |
| 1.1.5 主要仪器 | 第22-23页 |
| 1.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 1.2.1 pytH基因的扩增与纯化 | 第23页 |
| 1.2.2 重组质粒pET24b-pytH的构建 | 第23-24页 |
| 1.2.3 重组质粒pET24b-pytH在大肠杆菌中的诱导表达 | 第24-25页 |
| 1.2.4 菊酯水解酶PytH蛋白表达条件的优化 | 第25页 |
| 1.2.5 菊酯水解酶PytH的纯化 | 第25页 |
| 1.2.6 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE) | 第25-26页 |
| 1.2.7 菊酯水解酶PytH活性的检测 | 第26页 |
| 1.2.8 PytH稳定性的初步研究 | 第26页 |
| 1.2.9 不同纯化方法对PytH蛋白稳定性影响的研究 | 第26页 |
| 1.2.10 金属离子对PytH稳定性影响的研究 | 第26-27页 |
| 1.3 结果与分析 | 第27-35页 |
| 1.3.1 pytH基因的获得 | 第27页 |
| 1.3.2 重组质粒的构建 | 第27-28页 |
| 1.3.3 菊酯水解酶PytH在大肠杆菌中的诱导表达 | 第28-29页 |
| 1.3.4 PytH表达条件的优化 | 第29页 |
| 1.3.5 菊酯水解酶PytH的纯化 | 第29-30页 |
| 1.3.6 菊酯水解酶PytH活性的检测 | 第30-31页 |
| 1.3.7 PytH稳定性的初步研究 | 第31-32页 |
| 1.3.8 不同纯化方法对PytH蛋白稳定性影响的研究 | 第32-33页 |
| 1.3.9 金属离子对PytH稳定性影响的研究 | 第33-35页 |
| 1.4 讨论 | 第35页 |
| 1.5 小结 | 第35-37页 |
| 第二章 菊酯水解酶PytH晶体结构的解析 | 第37-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第37页 |
| 2.1.1 表达宿主菌 | 第37页 |
| 2.1.2 培养基 | 第37页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第37页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-39页 |
| 2.2.1 PytH蛋白的大量纯化 | 第37-38页 |
| 2.2.2 PytH蛋白结晶条件的初步筛选 | 第38页 |
| 2.2.3 PytH蛋白晶体的初步鉴定 | 第38页 |
| 2.2.4 硒代甲硫氨酸PytH蛋白的纯化与结晶 | 第38页 |
| 2.2.5 PytH蛋白结晶条件的优化 | 第38-39页 |
| 2.2.6 PytH蛋白与底物共结晶 | 第39页 |
| 2.2.7 PytH蛋白晶体衍射能力的检查及衍射数据采集 | 第39页 |
| 2.2.8 PytH蛋白晶体的结构解析 | 第39页 |
| 2.3 结果与分析 | 第39-46页 |
| 2.3.1 PytH蛋白的大量纯化 | 第39-40页 |
| 2.3.2 蛋白质晶体生长以及晶体的初步检查 | 第40-41页 |
| 2.3.3 硒代甲硫氨酸PytH蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| 2.3.4 PytH蛋白结晶条件的优化及晶体衍射结果 | 第42-44页 |
| 2.3.5 PytH蛋白晶体结构的解析 | 第44-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-47页 |
| 2.5 小结 | 第47-49页 |
| 全文总结 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 附录 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
