| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第17-27页 |
| 1.1 L-2,3-二氨基丙酸简介 | 第17页 |
| 1.2 氨基酸的生物合成 | 第17-19页 |
| 1.3 相关合成途径介绍 | 第19-22页 |
| 1.3.1 金黄色葡萄球菌中L-2,3-二氨基丙酸合成途径 | 第19-21页 |
| 1.3.2 苏云金芽孢杆菌中L-2,3-二氨基丙酸合成途径 | 第21-22页 |
| 1.4 3-磷酸甘油酸脱氢酶(PGDH)抗反馈抑制突变 | 第22页 |
| 1.5 Red重组技术 | 第22-24页 |
| 1.5.1 Red重组作用机理 | 第22-23页 |
| 1.5.2 Red同源重组功能质粒 | 第23页 |
| 1.5.3 Red同源重组技术方法 | 第23-24页 |
| 1.6 反义RNA干扰技术及应用 | 第24页 |
| 1.7 本课题的研究内容 | 第24-27页 |
| 第二章 合成L-2,3-二氨基丙酸外源酶基因的筛选 | 第27-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第27页 |
| 2.1.1 载体和菌株 | 第27页 |
| 2.1.2 培养基 | 第27页 |
| 2.1.3 实验仪器与试剂 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-34页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第27-28页 |
| 2.2.2 细菌基因组提取 | 第28-29页 |
| 2.2.3 质粒提取 | 第29页 |
| 2.2.4 PCR反应 | 第29-30页 |
| 2.2.5 胶回收 | 第30-31页 |
| 2.2.6 柱回收 | 第31页 |
| 2.2.7 酶切 | 第31页 |
| 2.2.8 连接体系 | 第31-32页 |
| 2.2.9 大肠杆菌化学法转化 | 第32页 |
| 2.2.10 重组质粒的筛选 | 第32页 |
| 2.2.11 目的蛋白的表达 | 第32-33页 |
| 2.2.12 目的蛋白的纯化 | 第33页 |
| 2.2.13 产物测定方法 | 第33-34页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第34-40页 |
| 2.3.1 外源路径的设计 | 第34-35页 |
| 2.3.2 重组质粒的构建 | 第35-38页 |
| 2.3.3 目的蛋白的纯化结果 | 第38-39页 |
| 2.3.4 外源酶实转化实验 | 第39-40页 |
| 2.4 本章小结 | 第40-41页 |
| 第三章 合成L-2,3-二氨基丙酸大肠杆菌的构建及优化 | 第41-67页 |
| 3.1 实验材料 | 第41页 |
| 3.1.1 载体和菌株 | 第41页 |
| 3.1.2 培养基 | 第41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-45页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第41-42页 |
| 3.2.2 质粒提取 | 第42页 |
| 3.2.3 PCR反应 | 第42-43页 |
| 3.2.4 胶回收 | 第43页 |
| 3.2.5 柱回收 | 第43页 |
| 3.2.6 酶切 | 第43页 |
| 3.2.7 连接体系 | 第43页 |
| 3.2.8 大肠杆菌化学法转化 | 第43页 |
| 3.2.9 Red重组 | 第43-44页 |
| 3.2.10 化转感受态细胞的制备 | 第44页 |
| 3.2.11 发酵实验方法 | 第44-45页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第45-64页 |
| 3.3.1 重组质粒构建以及BW25113发酵 | 第45-47页 |
| 3.3.2 过表达上游基因敲除支路基因提高前体供应 | 第47-51页 |
| 3.3.3 发酵菌株优化 | 第51-53页 |
| 3.3.4 serA抗反馈抑制突变(A345C G359C) | 第53-54页 |
| 3.3.5 模块优化 | 第54-56页 |
| 3.3.6 发酵条件优化 | 第56-59页 |
| 3.3.7 引入谷氨酸脱氢酶基因(gdhA) | 第59-60页 |
| 3.3.8 L-2,3-二氨基丙酸毒性实验 | 第60-62页 |
| 3.3.9 L-2,3-二氨基丙酸降解实验探究 | 第62-64页 |
| 3.4 本章小结 | 第64-67页 |
| 第四章 利用反义RNA干扰调控三羧酸循环 | 第67-75页 |
| 4.1 实验材料 | 第67-68页 |
| 4.1.1 载体和菌株 | 第67页 |
| 4.1.2 培养基 | 第67页 |
| 4.1.3 实验仪器与试剂 | 第67-68页 |
| 4.2 实验方法 | 第68-69页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第68页 |
| 4.2.2 质粒提取 | 第68页 |
| 4.2.3 PCR反应 | 第68页 |
| 4.2.4 胶回收 | 第68页 |
| 4.2.5 柱回收 | 第68页 |
| 4.2.6 酶切 | 第68页 |
| 4.2.7 连接体系 | 第68页 |
| 4.2.8 大肠杆菌化学法转化 | 第68-69页 |
| 4.2.9 大肠杆菌化转感受态细胞的制备 | 第69页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第69-74页 |
| 4.3.1 反义RNA干扰设计 | 第69-70页 |
| 4.3.2 pCS-SerA-SerC-EnoasRNA质粒的构建 | 第70-72页 |
| 4.3.3 BW △serB (pZE-SbnA-SbnB, pCS-SerA-SerC-EnoasRNA)菌株发酵 | 第72页 |
| 4.3.4 颜色反应法检测产物 | 第72-74页 |
| 4.4 本章小结 | 第74-75页 |
| 第五章 结论与展望 | 第75-77页 |
| 5.1 结论 | 第75页 |
| 5.2 展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 附录 | 第83-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第89-91页 |
| 作者和导师简介 | 第91-93页 |
| 附件 | 第93-95页 |
