| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号与缩略语说明 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 文献综述 | 第14-26页 |
| 1 农药污染现状及农药残留的生物修复 | 第14-16页 |
| ·农药使用及污染现状 | 第14-15页 |
| ·农药残留的生物修复 | 第15-16页 |
| 2 芳氧苯氧丙酸酯类除草剂简介及致毒机理 | 第16-18页 |
| ·芳氧苯氧丙酸酯类除草剂简介 | 第16-17页 |
| ·致毒机理 | 第17-18页 |
| 3 氰氟草酯性质及其降解方式 | 第18-19页 |
| 4 酯酶的研究简介 | 第19-21页 |
| 5 论文拟解决的关键问题、研究思路及内容 | 第21页 |
| ·要解决的关键问题 | 第21页 |
| ·本文研究思路及研究内容 | 第21页 |
| 参考文献 | 第21-26页 |
| 第一章 氰氟草酯降解菌的分离与鉴定 | 第26-40页 |
| 1 材料与方法 | 第26-30页 |
| ·培养基与试剂 | 第26-27页 |
| ·降解菌株的筛选和分离 | 第27页 |
| ·接种菌液的制备 | 第27页 |
| ·氰氟草酯含量的测定 | 第27页 |
| ·菌体生长量的测定 | 第27页 |
| ·降解菌株的培养特征及生理生化鉴定 | 第27-28页 |
| ·降解菌株的16S rRNA序列的PCR扩增和鉴定 | 第28-30页 |
| ·菌体总DNA的提取 | 第28页 |
| ·降解菌16S rRNA的PCR扩增 | 第28页 |
| ·普通感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第29-30页 |
| ·PCR产物的T/A克隆及酶连产物的转化 | 第30页 |
| ·16S rRNA的序列测定 | 第30页 |
| ·降解菌系统发育地位的确定 | 第30页 |
| 2. 结果与分析 | 第30-37页 |
| ·污染土壤中氰氟草酯降解菌株的分离 | 第30-31页 |
| ·降解菌株的鉴定结果 | 第31-32页 |
| ·菌株QDZ-1的形态及生理生化特征 | 第32-35页 |
| ·环境条件对降解菌株QDZ-1生长的影响 | 第35-37页 |
| ·温度对菌株QDZ-1生长的影响 | 第35页 |
| ·pH对菌株QDZ-1生长的影响 | 第35-36页 |
| ·NaCl对菌株QDZ-1生长的影响 | 第36页 |
| ·通气量对菌株QDZ-1生长的影响 | 第36-37页 |
| 3 本章小结 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-40页 |
| 第二章 氰氟草酯降解菌QDZ-1降解特性及代谢途径的研究 | 第40-50页 |
| 1 材料与方法 | 第40-41页 |
| ·培养基与试剂 | 第40页 |
| ·菌株QDZ-1利用氰氟草酯的生长降解曲线 | 第40-41页 |
| ·粗酶液的制备 | 第41页 |
| ·氰氟草酯及其降解产物的提取与检测 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-48页 |
| ·菌株QDZ-1以氰氟草酯为碳源的生长及降解试验 | 第41-42页 |
| ·粗酶液的效果验证 | 第42-43页 |
| ·菌株QDZ-1的降解特性研究 | 第43-45页 |
| ·温度对菌株QDZ-1降解氰氟草酯的影响 | 第43-44页 |
| ·pH对菌株QDZ-1降解氰氟草酯的影响 | 第44页 |
| ·接种量对菌株QDZ-1降解氰氟草酯的影响 | 第44-45页 |
| ·氰氟草酯起始浓度对菌株QDZ-1降解氰氟草酯的影响 | 第45页 |
| ·菌株QDZ-1降解氰氟草酯的代谢途径的初步研究 | 第45-48页 |
| ·菌株降解氰氟草酯代谢产物的MS分析 | 第45-46页 |
| ·代谢途径的推测 | 第46-48页 |
| 3. 本章小结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-50页 |
| 第三章 氰氟草酯水解酶(ChbH)的基因克隆、表达及纯化 | 第50-70页 |
| 第一节 氰氟草酯水解酶(ChbH)的基因克隆 | 第50-59页 |
| 1 材料与方法 | 第50-54页 |
| ·培养基与试剂 | 第50页 |
| ·所用菌株和质粒 | 第50-51页 |
| ·鸟枪法基因文库构建步骤示意图 | 第51页 |
| ·菌体总DNA的提取,质粒DNA的提取 | 第51页 |
| ·高效感受态细胞的制备 | 第51-52页 |
| ·降解菌QDZ-1总DNASau3AⅠ酶切体系 | 第52页 |
| ·酶切片段的回收 | 第52-53页 |
| ·酶连 | 第53页 |
| ·转化和基因文库的构建 | 第53-54页 |
| ·基因序列分析 | 第54页 |
| ·阳性克隆子降解氰氟草酯农药的液质检测 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-59页 |
| ·菌株QDZ-1的基因组DNA的提取和部分酶切及基因文库的构建 | 第54-56页 |
| ·阳性克隆测序和ORF分析 | 第56-57页 |
| ·chbH氨基酸序列分析 | 第57-59页 |
| 第二节 氰氟草酯水解酶(ChbH)蛋白原核表达和纯化 | 第59-68页 |
| 1 材料与方法 | 第59-64页 |
| ·培养基与试剂 | 第59页 |
| ·菌株和质粒 | 第59页 |
| ·菌体基因组DNA和质粒DNA的提取 | 第59页 |
| ·普通感受态细胞制备(BL21) | 第59-60页 |
| ·氰氟草酯水解酶基因PCR扩增 | 第60页 |
| ·PCR产物的纯化及酶切 | 第60页 |
| ·表达载体pET29a的制备 | 第60页 |
| ·表达载体的构建 | 第60-62页 |
| ·氰氟草酯水解酶的诱导表达 | 第62页 |
| ·ChbH蛋白的Ni-NTA亲和层析纯化 | 第62-64页 |
| ·ChbH活力测定 | 第64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-68页 |
| ·chbH的PCR扩增和基因重组表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·chbH在E.coli BL21中的表达、纯化及SDS-PAGE分析 | 第65-67页 |
| ·ChbH对不同底物的动力学常数 | 第67-68页 |
| 本章小结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-70页 |
| 硕士论文创新点 | 第70-72页 |
| 全文总结 | 第72-74页 |
| 附录 | 第74-82页 |
| 硕士期间发表论文和获得专利 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
