| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 第一章 序言 | 第10-23页 |
| 1.1 植物体细胞胚理论基础 | 第10-12页 |
| 1.1.1 体细胞胚培养历程及其假说 | 第10-11页 |
| 1.1.2 体细胞胚的特点、起源和发生途径 | 第11-12页 |
| 1.2 体细胞胚发生的调控 | 第12-15页 |
| 1.2.1 激素对体细胞胚发生的影响 | 第12-14页 |
| 1.2.2 植物基因型对体细胞胚发生的影响 | 第14页 |
| 1.2.3 愈伤组织培养时间对体细胞胚发生的影响 | 第14-15页 |
| 1.2.4 外植体对体细胞胚发生的影响 | 第15页 |
| 1.3 体细胞胚发生相关基因的调控 | 第15-17页 |
| 1.4 植物干细胞决定基因WUS和MYB118基因研究进展 | 第17-20页 |
| 1.5 巴西橡胶树体细胞胚发生概况 | 第20-21页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 1.7 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 拟南芥WUSCHEL基因的克隆及AtWUSCHEL、AtMYB118基因植物表达载体的构建 | 第23-35页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 菌种和质粒载体 | 第23页 |
| 2.1.3 常用生化试剂和酶 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-31页 |
| 2.2.1 拟南芥WUSCHEL基因的克隆 | 第23-28页 |
| 2.2.2 AtWUSCHEL和AtMYB118植物表达载体的构建 | 第28-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-35页 |
| 2.3.1 拟南芥RNA的提取 | 第31页 |
| 2.3.2 拟南芥AtWUS基因的扩增 | 第31页 |
| 2.3.3 拟南芥AtWUS基因TA克隆鉴定 | 第31-33页 |
| 2.3.4 中间植物表达载体的酶切检测结果 | 第33页 |
| 2.3.5 植物表达载体pCAMBIA2301-WUS酶切鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.6 植物表达载体pCAMBIA2301-MYB118酶切鉴定 | 第34-35页 |
| 第三章 根癌农杆菌介导的AtWUSCHEL和AtMYB118基因转化橡胶树易碎胚性愈伤组织及其植株再生 | 第35-65页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第35-38页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第35页 |
| 3.1.2 农杆菌菌株与质粒 | 第35页 |
| 3.1.3 植物组织培养基 | 第35-36页 |
| 3.1.4 重要试剂和药品 | 第36页 |
| 3.1.5 TTC药品的配制 | 第36页 |
| 3.1.6 基因组DNA提取裂解缓冲液配制 | 第36-37页 |
| 3.1.7 杂交所需试剂 | 第37-38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-46页 |
| 3.2.1 卡那霉素对橡胶树品种热研88-13易碎胚性愈伤组织生长的影响 | 第38页 |
| 3.2.2 根癌农杆菌介导的AtWUS基因对橡胶树品种热研88-13易碎胚性愈伤组织遗传转化条件的优化 | 第38-39页 |
| 3.2.3 TTC细胞活力的测定 | 第39-40页 |
| 3.2.4 GUS组织化学染色 | 第40-41页 |
| 3.2.5 试验数据统计与分析 | 第41页 |
| 3.2.6 愈伤组织的抗性筛选 | 第41页 |
| 3.2.7 抗性愈伤组织诱导体细胞胚与植株再生 | 第41页 |
| 3.2.8 拟转化植株的分子检测 | 第41-46页 |
| 3.3 结果与分析 | 第46-65页 |
| 3.3.1 不同浓度的卡那霉素对热研88-13长期继代易碎愈伤组织生长的影响 | 第46页 |
| 3.3.2 正交设计各实验因子对侵染愈伤组织GUS瞬时表达的影响 | 第46-52页 |
| 3.3.3 农杆菌介导的AtMYB118基因对橡胶树热研8-79易碎愈伤组织的转化 | 第52页 |
| 3.3.4 橡胶树品种热研88-13转AtWUS基因抗性愈伤组织与对照出胚数目比较 | 第52-53页 |
| 3.3.5 橡胶树品种热研88-13转AtWUS基因抗性易碎愈伤组织GUS染色及体细胞胚发生 | 第53-54页 |
| 3.3.6 橡胶树品种热研88-13转AtWUS基因抗性易碎愈伤组织的筛选及植株再生 | 第54-55页 |
| 3.3.7 橡胶树品种热研88-13转AtWUS基因拟转化植株GUS染色鉴定 | 第55-56页 |
| 3.3.8 橡胶树品种热研88-13转AtWUS基因拟转化植株分子检测 | 第56-62页 |
| 3.3.9 橡胶树品种热研88-13转AtWUS基因部分GUS阳性植株表型特性 | 第62-63页 |
| 3.3.10 橡胶树品种热研8-79转AtMYB118基因抗性易碎愈伤组织GUS染色及体细胞胚发生 | 第63-64页 |
| 3.3.11 橡胶树品种热研8-79转AtMYB118基因拟转化抗性植株GUS染色鉴定 | 第64-65页 |
| 第四章 讨论 | 第65-68页 |
| 4.1 关于卡那霉素对橡胶树不同受体的抑制作用 | 第65页 |
| 4.2 预培养时间对遗传转化效率的影响 | 第65-66页 |
| 4.3 AS浓度对遗传转化效率的影响 | 第66页 |
| 4.4 侵染时间对遗传转化效率的影响 | 第66页 |
| 4.5 共培养温度和共培养时间对遗传转化效率的影响 | 第66-67页 |
| 4.6 关于AtWUS基因对转化植株表型的探讨 | 第67-68页 |
| 第五章 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 附表1 | 第78-79页 |
| 附表2 | 第79-80页 |
| 附图1 | 第80-81页 |
| 附图2 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
