| 致谢 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-32页 |
| 1.1 γ-氨基丁酸 | 第14-18页 |
| 1.1.1 γ-氨基丁酸的结构与性质 | 第14-15页 |
| 1.1.2 γ-氨基丁酸的研究历史 | 第15页 |
| 1.1.3 γ-氨基丁酸的生理功能 | 第15-16页 |
| 1.1.4 γ-氨基丁酸的制备方法 | 第16-18页 |
| 1.2 谷氨酸脱羧酶 | 第18-22页 |
| 1.2.1 谷氨酸脱羧酶的性质 | 第18-19页 |
| 1.2.2 谷氨酸脱羧酶的来源 | 第19-22页 |
| 1.3 酶的稳定性 | 第22-24页 |
| 1.3.1 酶稳定性简介 | 第22-23页 |
| 1.3.2 影响蛋白酶稳定性的因素 | 第23-24页 |
| 1.4 酶稳定性改造的策略和研究进展 | 第24-28页 |
| 1.4.1 理性设计提高酶的稳定性 | 第25-26页 |
| 1.4.2 非理性设计提高酶的稳定性 | 第26页 |
| 1.4.3 半理性设计提高酶的稳定性 | 第26-28页 |
| 1.5 拉氏图简介 | 第28-30页 |
| 1.6 课题的研究目的和内容 | 第30-32页 |
| 第二章 基于拉氏图信息提高谷氨酸脱羧酶催化性能 | 第32-52页 |
| 2.1 引言 | 第32页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第32-35页 |
| 2.2.1 化学试剂 | 第32-33页 |
| 2.2.2 分子生物学试剂 | 第33页 |
| 2.2.3 质粒与菌种 | 第33页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第33页 |
| 2.2.5 培养基配制 | 第33-34页 |
| 2.2.6 溶液配置 | 第34-35页 |
| 2.3 实验方法 | 第35-42页 |
| 2.3.1 大肠杆菌质粒提取 | 第35-36页 |
| 2.3.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36页 |
| 2.3.3 大肠杆菌感受态转化 | 第36-37页 |
| 2.3.4 GAD1407突变体文库的构建 | 第37-39页 |
| 2.3.5 阳性克隆的鉴定 | 第39页 |
| 2.3.6 野生酶和突变酶的表达和纯化 | 第39-40页 |
| 2.3.7 突变酶文库筛选 | 第40页 |
| 2.3.8 酶学参数的测定 | 第40-42页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第42-51页 |
| 2.4.1 GAD1407的拉氏图构建及分析 | 第42-44页 |
| 2.4.2 定点饱和突变文库 | 第44-45页 |
| 2.4.3 突变文库初筛 | 第45-46页 |
| 2.4.4 野生型酶和突变酶的酶学性质测定 | 第46-49页 |
| 2.4.5 突变酶的结构模拟与突变位点分析 | 第49-51页 |
| 2.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第三章 野生型酶和突变酶K413A的热力学稳定性研究 | 第52-70页 |
| 3.1 引言 | 第52页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第52-53页 |
| 3.2.1 化学试剂 | 第52页 |
| 3.2.2 质粒与菌种 | 第52页 |
| 3.2.3 培养基配方 | 第52页 |
| 3.2.4 溶液配置 | 第52-53页 |
| 3.2.5 主要实验仪器 | 第53页 |
| 3.3 实验方法 | 第53-57页 |
| 3.3.1 野生型酶和突变酶的表达 | 第53页 |
| 3.3.2 野生型酶和突变酶的分离纯化 | 第53页 |
| 3.3.3 野生型酶和突变酶K413A的荧光发射图谱 | 第53-54页 |
| 3.3.4 野生型酶和突变酶K413A的荧光相图 | 第54-57页 |
| 3.3.5 不同浓度变性剂对谷氨酸脱羧酶活力的影响 | 第57页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第57-67页 |
| 3.4.1 野生型酶和突变酶K413A纯化 | 第57-58页 |
| 3.4.2 盐酸胍和脲诱导野生型酶和突变酶K413A去折叠的研究 | 第58-65页 |
| 3.4.3 盐酸胍和脲诱导野生型酶和突变酶K413A去折叠的荧光相图分析 | 第65-67页 |
| 3.5 本章小结 | 第67-70页 |
| 第四章 结论与展望 | 第70-72页 |
| 4.1 结论 | 第70页 |
| 4.2 展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-84页 |
| 附录1 短乳杆菌GAD的序列信息 | 第84-85页 |
| 附录2 Easypure~(?) Plasmid Miniprep Kit说明书 | 第85-86页 |
| 附录3 PCR产物纯化试剂盒说明书 | 第86-87页 |
| 附录4 NI-NTA蛋白纯化试剂盒说明书 | 第87-88页 |
| 附录5 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第88-90页 |
| 附录6 考马斯亮蓝法测定GAD的含量 | 第90-92页 |
| 作者简介 | 第92页 |
