| 致谢 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩写简表 | 第11-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-41页 |
| 1.1 异戊二烯简介 | 第16页 |
| 1.2 异戊二烯的应用 | 第16-18页 |
| 1.2.1 异戊二烯在聚合物领域的应用 | 第16-17页 |
| 1.2.2 异戊二烯在精细化工领域的应用 | 第17-18页 |
| 1.3 异戊二烯的工业生产工艺 | 第18-21页 |
| 1.3.1 C_5馏分分离生产异戊二烯 | 第18-19页 |
| 1.3.2 脱氢法生产异戊二烯工艺 | 第19-20页 |
| 1.3.3 化学合成异戊二烯工艺 | 第20页 |
| 1.3.4 生物合成法 | 第20-21页 |
| 1.4 合成代谢途径概述及进展 | 第21-27页 |
| 1.4.1 合成代谢途径的发展及定义 | 第21-22页 |
| 1.4.2 合成代谢途径的基础生物组件及工具 | 第22-23页 |
| 1.4.3 合成代谢工程的策略及创新性实例 | 第23-27页 |
| 1.5 类异戊二烯的生物合成 | 第27-38页 |
| 1.5.1 类异戊二烯 | 第27页 |
| 1.5.2 类异戊二烯的生物合成途径 | 第27-30页 |
| 1.5.3 经典的药物类异戊二烯生物合成实例 | 第30-34页 |
| 1.5.4 异戊二烯的生物合成研究进展 | 第34-38页 |
| 1.6 本课题的研究内容及意义 | 第38-41页 |
| 第二章 大肠杆菌中调控MEP途径提高异戊二烯的产量 | 第41-65页 |
| 2.1 前言 | 第41-42页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第42-43页 |
| 2.2.1 菌株及质粒 | 第42页 |
| 2.2.2 生化试剂及药品 | 第42页 |
| 2.2.3 试剂及培养基配方 | 第42-43页 |
| 2.2.4 仪器设备 | 第43页 |
| 2.3 实验方法 | 第43-53页 |
| 2.3.1 分子克隆的常规生物学操作 | 第43-45页 |
| 2.3.2 Isps,Dxs,Dxr,Idi多基因重组质粒的构建 | 第45-48页 |
| 2.3.3 Dxs/Dxr/Idi的共定向进化 | 第48-50页 |
| 2.3.4 大肠杆菌的培养及细胞生长的标定 | 第50-51页 |
| 2.3.5 蛋白电泳及Gel-Pro Analyzer软件分析 | 第51页 |
| 2.3.6 不相容质粒的共存验证 | 第51页 |
| 2.3.7 异戊二烯的定性分析及定量检测 | 第51-52页 |
| 2.3.8 番茄红素的提取与分析检测 | 第52-53页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第53-63页 |
| 2.4.1 异戊二烯合成途径的构建 | 第53-54页 |
| 2.4.2 pET-32a和pET-30a不相容质粒体系的稳定性验证 | 第54-56页 |
| 2.4.3 MEP途径中关键酶的确定 | 第56-57页 |
| 2.4.4 关键酶的串联表达及顺序调控 | 第57-61页 |
| 2.4.5 串联Dxs/Dxr/Idi的共定向进化 | 第61-63页 |
| 2.5. 本章小结 | 第63-65页 |
| 第三章 酿酒酵母中整合工具的构建 | 第65-92页 |
| 3.1 引言 | 第65-66页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第66-67页 |
| 3.2.1 菌株及质粒 | 第66页 |
| 3.2.2 实验仪器及生化材料 | 第66-67页 |
| 3.3 实验方法 | 第67-82页 |
| 3.3.1 分子生物学操作 | 第67-68页 |
| 3.3.2 pUMRI工具盒的构建 | 第68-71页 |
| 3.3.3 pUMRI工具盒的使用方法 | 第71-72页 |
| 3.3.4 pUMRI工具盒的marker去除表征 | 第72-73页 |
| 3.3.5 多基因β-胡萝卜素合成途径途径的组装及基因型验证 | 第73-75页 |
| 3.3.6 多基因甲羟戊酸途径(MVA)的组装 | 第75-79页 |
| 3.3.7 多基因番茄红素合成途径的组装 | 第79-81页 |
| 3.3.8 组装途径的功能分析 | 第81-82页 |
| 3.3.9 重组菌的生长曲线制作 | 第82页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第82-90页 |
| 3.4.1 pUMRI工具的构建及循环使用策略 | 第82-84页 |
| 3.4.2 整合工具选择标记去除表征 | 第84-85页 |
| 3.4.3 pUMRI工具盒在较长途径整合中的应用 | 第85-90页 |
| 3.5 本章小结 | 第90-92页 |
| 第四章 酿酒酵母细胞质中的代谢调控 | 第92-123页 |
| 4.1 前言 | 第92-94页 |
| 4.2 实验仪器及材料 | 第94页 |
| 4.3 实验方法 | 第94-102页 |
| 4.3.1 乙酸检测及标曲制作 | 第94-95页 |
| 4.3.2 乙醇检测及标曲制作 | 第95页 |
| 4.3.3 载体及菌株的构建 | 第95-101页 |
| 4.3.4 启动子比较方法 | 第101-102页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第102-120页 |
| 4.4.1 异戊二烯生物合成途径的构建 | 第102-103页 |
| 4.4.2 MVA途径的代谢调控 | 第103-106页 |
| 4.4.3 乙酰辅酶A途径的代谢调控 | 第106-111页 |
| 4.4.4 异戊二烯合成支路的代谢调控 | 第111-120页 |
| 4.5 本章小结 | 第120-123页 |
| 第五章 酿酒酵母中不同亚细胞域乙酰辅酶A的综合利用 | 第123-139页 |
| 5.1 前言 | 第123-124页 |
| 5.2 实验仪器、材料、培养基及引物 | 第124-126页 |
| 5.3 实验方法 | 第126-131页 |
| 5.3.1 基因在线粒体中的定位方法及鉴定 | 第126-127页 |
| 5.3.2 MVA途径组装及调控中的质粒构建 | 第127-129页 |
| 5.3.3 细胞质和线粒体双调控策略及菌株构建 | 第129-130页 |
| 5.3.4 基因型验证 | 第130-131页 |
| 5.3.5 发酵条件 | 第131页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第131-137页 |
| 5.4.1 线粒体中MVA途径的构建 | 第131-132页 |
| 5.4.2 线粒体中MVA途径的整合对细胞生长及异戊二烯产量的影响 | 第132-135页 |
| 5.4.3 碳源、好氧调控提高细胞生长量及异戊二烯的产量 | 第135-136页 |
| 5.4.4 MVA途径在细胞质和线粒体内的双调控 | 第136-137页 |
| 5.5 本章小结 | 第137-139页 |
| 第六章 结论与展望 | 第139-142页 |
| 6.1 结论 | 第139-140页 |
| 6.2 展望 | 第140-142页 |
| 参考文献 | 第142-154页 |
| 附录 | 第154-161页 |
| 作者简历及攻读博士学位期间的研究成果 | 第161-162页 |
