| 摘要 | 第5-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 前言 | 第14-20页 |
| 1、 项目的研究背景 | 第14页 |
| 2、 microRNA的概念 | 第14-15页 |
| 3、 microRNA与恶性肿瘤 | 第15页 |
| 4、 肿瘤干细胞与恶性肿瘤 | 第15-16页 |
| 5、课题研究的提出 | 第16-17页 |
| 6、 课题问题的提出 | 第17-18页 |
| 7、 课题的创新点 | 第18页 |
| 8、 课题的技术路线 | 第18-20页 |
| 第一部分 结肠癌干细胞的分选、扩增和鉴定 | 第20-40页 |
| 1.1 结肠癌肿瘤干细胞表面分子的检索 | 第20-21页 |
| 1.1.1 实验材料与方法 | 第20-21页 |
| 1.1.2 实验结果 | 第21页 |
| 1.2 结肠癌肿瘤细胞的培养及结肠癌肿瘤干细胞的分离 | 第21-28页 |
| 1.2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 1.2.2 实验方法 | 第23-25页 |
| 1.2.3 实验结果 | 第25-28页 |
| 1.3 结肠癌肿瘤干细胞的鉴定 | 第28-36页 |
| 1.3.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 1.3.2 实验方法 | 第29-32页 |
| 1.3.3 实验结果 | 第32-36页 |
| 1.4 讨论 | 第36-40页 |
| 第二部分 结肠癌干细胞差异表达基因、microRNA和mRNA的检测 | 第40-56页 |
| 2.1 实验试剂与方法 | 第41-46页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第41-42页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第42-46页 |
| 2.2 实验结果 | 第46-52页 |
| 2.2.1 microRNA芯片扫描图 | 第46页 |
| 2.2.2 microRNA芯片热图 | 第46-48页 |
| 2.2.3 microRNA芯片原始数据 | 第48页 |
| 2.2.4 mRNA芯片原始数据 | 第48-52页 |
| 2.3 讨论 | 第52-56页 |
| 第三部分 结肠癌干细胞差异表达microRNA靶基因的预测与确证 | 第56-89页 |
| 3.1 实验试剂与方法 | 第56-63页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第57-58页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第58-63页 |
| 3.2 实验结果 | 第63-81页 |
| 3.2.1 差异microRNA靶基因预测 | 第63-64页 |
| 3.2.2 负调控microRNA-mRNA分析 | 第64-67页 |
| 3.2.3 反向相关靶基因Gene Ontology分析 | 第67-69页 |
| 3.2.4 反向相关靶基因PATHWAY分析 | 第69-70页 |
| 3.2.5 构建microRNA的靶基因功能调控网络microRNA-GO-network | 第70-73页 |
| 3.2.6 构建差异microRNA的显著性功能靶基因网络：microRNA-Gene-Network | 第73-75页 |
| 3.2.7 差异microRNA的显著性功能靶基因网络：microRNA-Path net构建 | 第75-78页 |
| 3.2.8 差异表达microRNA和相关靶基因的表达水平的验证 | 第78-81页 |
| 3.3 讨论 | 第81-89页 |
| 第四部分 miR-449b与CCND1和E2F3调控结肠癌干细胞自我更新功能的研究 | 第89-112页 |
| 4.1 实验材料与方法 | 第91-101页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第91-93页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第93-101页 |
| 4.2 实验结果 | 第101-107页 |
| 4.2.1 调控互补区段 | 第101页 |
| 4.2.2 CCND1和E2F3蛋白的表达水平 | 第101页 |
| 4.2.3 miR-449b的表达水平 | 第101-102页 |
| 4.2.4 CCND1和E2F3 3’-UTR的克隆 | 第102页 |
| 4.2.5 载体的构建 | 第102-103页 |
| 4.2.6 处理组miR-449b的表达水平 | 第103-104页 |
| 4.2.7 处理组CCND1和E2F3蛋白的表达水平 | 第104页 |
| 4.2.8 双荧光素酶报告基因实验 | 第104-105页 |
| 4.2.9 MTT实验 | 第105页 |
| 4.2.10 细胞周期的检测 | 第105-107页 |
| 4.2.11 检测细胞周期相关蛋白和癌基因相关蛋白的表达水平变化 | 第107页 |
| 4.3 讨论 | 第107-112页 |
| 附录一 参考文献 | 第112-119页 |
| 附录二 中英文缩略词表 | 第119-120页 |
| 附录三 综述 | 第120-132页 |
| 综述引文 | 第127-132页 |
| 附录四 在读期间发表的论文、承担的课题以及获奖情况 | 第132-134页 |
| 附件 | 第134-141页 |
| 致谢 | 第141-143页 |
| 本论文受科研基金资助情况 | 第143-144页 |
