| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 犬副流感研究进展 | 第12-17页 |
| 1.1.1 犬副流感病毒的流行病学 | 第12-13页 |
| 1.1.2 犬副流感病毒的病原学特性 | 第13页 |
| 1.1.3 犬副流感病毒基因结构及蛋白功能 | 第13-14页 |
| 1.1.4 犬副流感病毒的致病机制 | 第14-15页 |
| 1.1.5 犬副流感病毒的临床诊断 | 第15-17页 |
| 1.1.5.1 病原检测 | 第16页 |
| 1.1.5.2 抗体检测 | 第16-17页 |
| 1.2 抗体研究进展 | 第17-25页 |
| 1.2.1 抗体基本结构与功能 | 第17-22页 |
| 1.2.1.1 抗体的单分子结构和功能 | 第17-20页 |
| 1.2.1.2 抗体的分类 | 第20-21页 |
| 1.2.1.3 抗体的基因组结构和功能 | 第21-22页 |
| 1.2.2 单克隆抗体技术 | 第22-24页 |
| 1.2.2.1 实验动物 | 第22页 |
| 1.2.2.2 骨髓瘤细胞 | 第22-23页 |
| 1.2.2.3 细胞融合试验 | 第23-24页 |
| 1.2.3 基因工程抗体 | 第24-25页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 2 试验材料 | 第26-28页 |
| 2.1 病毒、细胞及动物 | 第26页 |
| 2.2 主要药品及试剂 | 第26页 |
| 2.3 主要试剂配制 | 第26-28页 |
| 2.4 主要仪器及设备 | 第28页 |
| 3 试验方法 | 第28-36页 |
| 3.1 细胞的复苏和培养 | 第28-29页 |
| 3.2 病毒毒价测定 | 第29页 |
| 3.3 病毒扩增和浓缩 | 第29页 |
| 3.4 血凝试验 | 第29页 |
| 3.5 BCA法测定蛋白浓度 | 第29-30页 |
| 3.6 动物免疫 | 第30页 |
| 3.7 间接ELISA方法的建立 | 第30页 |
| 3.8 单克隆抗体的制备 | 第30-33页 |
| 3.8.1 间接ELISA方法检测免疫小鼠血清效价 | 第30-31页 |
| 3.8.2 SP2/0 骨髓瘤细胞的制备 | 第31页 |
| 3.8.3 免疫脾细胞的制备 | 第31页 |
| 3.8.4 饲养细胞的制备 | 第31页 |
| 3.8.5 细胞融合 | 第31-32页 |
| 3.8.6 阳性杂交瘤细胞亚克隆 | 第32页 |
| 3.8.7 单克隆抗体的大量制备 | 第32页 |
| 3.8.8 单克隆抗体的效价检测 | 第32-33页 |
| 3.9 间接免疫荧光试验 | 第33页 |
| 3.10 Western Blot试验 | 第33页 |
| 3.11 细胞/病毒RNA提取 | 第33页 |
| 3.12 RNA反转及基因扩增 | 第33-34页 |
| 3.13 质粒构建 | 第34-35页 |
| 3.14 细胞转染实验 | 第35页 |
| 3.15 重组蛋白的原核表达 | 第35页 |
| 3.16 蛋白变性复性 | 第35-36页 |
| 4 试验结果 | 第36-46页 |
| 4.1 犬副流感病毒的扩增和浓缩 | 第36-37页 |
| 4.1.1 病毒的扩增 | 第36页 |
| 4.1.2 病毒的血凝试验 | 第36-37页 |
| 4.1.3 病毒的浓缩 | 第37页 |
| 4.2 单克隆抗体的特性鉴定 | 第37-42页 |
| 4.2.1 单抗的效价及亚型鉴定 | 第37-38页 |
| 4.2.2 单抗针对感染病毒细胞的IFA结果 | 第38-39页 |
| 4.2.3 单抗针对浓缩病毒的Western blot试验结果 | 第39页 |
| 4.2.4 单抗针对病毒各种结构蛋白的IFA结果 | 第39-41页 |
| 4.2.5 单抗针对N蛋白的靶位抗原区域的IFA结果 | 第41-42页 |
| 4.3 抗体基因的研究 | 第42-46页 |
| 4.3.1 抗体可变区基因的扩增和鉴定 | 第42-43页 |
| 4.3.2 抗体可变区基因序列的分析 | 第43-44页 |
| 4.3.3 33B5 抗体可变区蛋白的表达 | 第44页 |
| 4.3.4 33B5scFv蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| 4.3.5 33B5scFv蛋白活性的鉴定 | 第45-46页 |
| 5 讨论 | 第46-49页 |
| 5.1 病毒扩增与浓缩 | 第46页 |
| 5.2 小鼠免疫与单抗筛选 | 第46-47页 |
| 5.3 抗体基因扩增与分析 | 第47-48页 |
| 5.4 33B5scFv蛋白的表达与生物活性分析 | 第48-49页 |
| 6 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
