| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第22-23页 |
| 第一章 引言 | 第23-39页 |
| 1.1 昆虫翅发育的研究进展 | 第24-27页 |
| 1.2 影响蚜虫翅型分化的因子 | 第27-29页 |
| 1.2.1 外界因子 | 第27-28页 |
| 1.2.2 内部因子 | 第28-29页 |
| 1.3 MicroRNA的研究概况 | 第29-32页 |
| 1.3.1 MiRNA的作用机制 | 第31页 |
| 1.3.2 MiRNA的研究方法 | 第31-32页 |
| 1.4 MiRNA在昆虫中的研究 | 第32-35页 |
| 1.5 MiRNA在昆虫翅型分化上的研究 | 第35-37页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第37页 |
| 1.7 研究内容与拟解决的关键问题 | 第37页 |
| 1.7.1 研究内容 | 第37页 |
| 1.7.2 拟解决的关键问题 | 第37页 |
| 1.8 技术路线 | 第37-39页 |
| 1.8.1 外界因子对麦长管蚜翅型分化的影响 | 第37-38页 |
| 1.8.2 MiRNA对麦长管蚜翅型分化的研究 | 第38-39页 |
| 第二章 麦长管蚜两翅型外部形态的比较 | 第39-52页 |
| 2.1 试验材料 | 第39-40页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第39页 |
| 2.1.2 饲养皿的制备 | 第39页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第39-40页 |
| 2.2 试验方法 | 第40页 |
| 2.2.1 形态学测量 | 第40页 |
| 2.2.2 扫描电镜样品的制备 | 第40页 |
| 2.3 统计分析 | 第40页 |
| 2.4 结果与分析 | 第40-49页 |
| 2.4.1 麦长管蚜有翅型与无翅型各龄期若蚜及成蚜形态测量比较 | 第40-43页 |
| 2.4.2 麦长管蚜不同龄期若蚜及成蚜中胸外部形态的比较 | 第43页 |
| 2.4.3 麦长管蚜不同龄期若蚜及成蚜触角外部形态比较 | 第43-45页 |
| 2.4.4 麦长管蚜不同龄期若蚜及成蚜尾片外部形态的比较 | 第45页 |
| 2.4.5 麦长管蚜不同龄期若蚜及成蚜腹管外部形态的比较 | 第45-49页 |
| 2.5 结论与讨论 | 第49-51页 |
| 2.5.1 麦长管蚜两翅型各龄期若蚜及成蚜形态测量学研究 | 第49页 |
| 2.5.2 麦长管蚜两翅型各龄期若蚜及成蚜外部形态的研究 | 第49-51页 |
| 2.6 小结 | 第51-52页 |
| 第三章 外界因子对麦长管蚜翅型分化的影响 | 第52-66页 |
| 3.1 试验材料 | 第52-53页 |
| 3.1.1 供试昆虫 | 第52页 |
| 3.1.2 饲养皿的制备 | 第52页 |
| 3.1.3 全人工饲料配制 | 第52页 |
| 3.1.4 饲蚜器的制备 | 第52-53页 |
| 3.2 主要试剂和仪器 | 第53页 |
| 3.3 试验方法 | 第53-55页 |
| 3.3.1 拥挤效应 | 第53页 |
| 3.3.2 温度效应 | 第53页 |
| 3.3.3 母代效应 | 第53-54页 |
| 3.3.4 营养效应 | 第54-55页 |
| 3.4 数据处理 | 第55页 |
| 3.5 结果与分析 | 第55-64页 |
| 3.5.1 不同拥挤度对麦长管蚜初产若蚜翅型分化的影响 | 第55页 |
| 3.5.2 温度对麦长管蚜初产若蚜翅型分化的影响 | 第55-57页 |
| 3.5.3 母代效应对麦长管蚜若蚜翅型分化的影响 | 第57-58页 |
| 3.5.4 寄主营养对麦长管蚜翅型分化的影响 | 第58-64页 |
| 3.6 结论与讨论 | 第64-65页 |
| 3.7 小结 | 第65-66页 |
| 第四章 麦长管蚜有翅成蚜和无翅成蚜miRNAs的深度测序 | 第66-90页 |
| 4.1 试验材料 | 第66-67页 |
| 4.1.1 供试昆虫 | 第66页 |
| 4.1.2 主要数据库及软件 | 第66-67页 |
| 4.1.3 主要试剂和仪器 | 第67页 |
| 4.2 试验方法 | 第67-70页 |
| 4.2.1 总RNA样本的提取 | 第67页 |
| 4.2.2 麦长管蚜miRNAs文库的构建和高通量测序 | 第67-68页 |
| 4.2.3 MiRNAs生物信息学分析 | 第68页 |
| 4.2.4 MiRNAs二级结构的预测 | 第68-69页 |
| 4.2.5 两样本miRNAs的差异分析 | 第69页 |
| 4.2.6 靶基因功能的预测和Pathway分析 | 第69-70页 |
| 4.2.7 翅型分化相关miRNAs的筛选 | 第70页 |
| 4.3 结果与分析 | 第70-87页 |
| 4.3.1 RNA样品质量检测 | 第70-71页 |
| 4.3.2 麦长管蚜miRNAs高通量测序及生物信息学分析 | 第71-75页 |
| 4.3.3 麦长管蚜两翅型miRNAs的鉴定 | 第75-76页 |
| 4.3.4 麦长管蚜两翅型中差异基因的筛选 | 第76-78页 |
| 4.3.5 麦长管蚜两种翅型miRNAs的核酸偏移性分析 | 第78页 |
| 4.3.6 麦长管蚜两个文库中miRNAs的保守性分析 | 第78-80页 |
| 4.3.7 麦长管蚜两翅型中miRNAs的靶标预测 | 第80-82页 |
| 4.3.8 翅型分化相关的miRNAs的筛选及同源性分析 | 第82-87页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第87-88页 |
| 4.4.1 麦长管蚜的miRNAs的一般特征 | 第87页 |
| 4.4.2 麦长管蚜保守的miRNAs和新的miRNAs | 第87-88页 |
| 4.4.3 MiRNAs的功能及靶标预测 | 第88页 |
| 4.4.4 与翅型分化相关的miRNAs的筛选 | 第88页 |
| 4.5 小结 | 第88-90页 |
| 第五章 麦长管蚜翅型分化相关miRNAs的克隆及表达谱分析 | 第90-113页 |
| 5.1 试验材料 | 第90-93页 |
| 5.1.1 供试昆虫 | 第90页 |
| 5.1.2 数据来源 | 第90-91页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第91页 |
| 5.1.4 主要溶液配置 | 第91页 |
| 5.1.5 主要仪器设备 | 第91-92页 |
| 5.1.6 引物设计 | 第92-93页 |
| 5.2 试验方法 | 第93-98页 |
| 5.2.1 总RNA的提取 | 第93-94页 |
| 5.2.2 总RNA的检测 | 第94页 |
| 5.2.3 cDNA的合成 | 第94页 |
| 5.2.4 RT-PCR反应体系 | 第94-96页 |
| 5.2.5 PCR产物的回收 | 第96页 |
| 5.2.6 连接转化 | 第96页 |
| 5.2.7 PCR鉴定阳性克隆及序列测定 | 第96-97页 |
| 5.2.8 qRT-PCR定量分析 | 第97-98页 |
| 5.2.9 荧光定量标准曲线的制作 | 第98页 |
| 5.2.10 荧光定量PCR数据分析 | 第98页 |
| 5.3 结果与分析 | 第98-111页 |
| 5.3.1 总RNA的提取 | 第98-99页 |
| 5.3.2 MiRNA成熟序列的克隆 | 第99-100页 |
| 5.3.3 内参U6的克隆与序列分析 | 第100-102页 |
| 5.3.4 9 个miRNAs及内参U6上机检测引物的特异性 | 第102-108页 |
| 5.3.5 9 个miRNAs在两翅型中的表达谱分析 | 第108-111页 |
| 5.4 结论与讨论 | 第111-112页 |
| 5.5 小结 | 第112-113页 |
| 第六章 有翅和无翅若蚜miRNAs的深度测序及相关miRNAs表达谱分析 | 第113-126页 |
| 6.1 试验材料 | 第113-114页 |
| 6.1.1 麦长管蚜若蚜及成蚜的收集 | 第113-114页 |
| 6.1.2 主要数据库及软件 | 第114页 |
| 6.1.3 主要试剂 | 第114页 |
| 6.1.4 主要溶液配置 | 第114页 |
| 6.1.5 主要仪器 | 第114页 |
| 6.1.6 引物设计 | 第114页 |
| 6.2 实验方法 | 第114-115页 |
| 6.2.1 麦长管蚜miRNAs文库的构建、高通量测序及生物信息学分析 . 926.2.2 总RNA的提取及检测 | 第114页 |
| 6.2.2 总RNA的提取及检测 | 第114页 |
| 6.2.3 cDNA的合成 | 第114页 |
| 6.2.4 RT-PCR反应体系 | 第114页 |
| 6.2.5 qRT-PCR定量分析 | 第114-115页 |
| 6.2.6 数据分析 | 第115页 |
| 6.3 结果与分析 | 第115-124页 |
| 6.3.1 麦长管蚜miRNAs高通量测序及生物信息学分析 | 第115-119页 |
| 6.3.2 总RNA的提取及检测 | 第119-120页 |
| 6.3.3 9 个miRNAs在两翅型不同龄期中的表达 | 第120-121页 |
| 6.3.4 9 个miRNAs在两翅型不同龄期中的表达谱分析 | 第121-124页 |
| 6.4 结论与讨论 | 第124-125页 |
| 6.4.1 麦长管蚜不同龄期miRNAs的一般特征 | 第124页 |
| 6.4.2 9 个miRNAs在两翅型不同龄期的表达谱分析 | 第124-125页 |
| 6.5 小结 | 第125-126页 |
| 第七章 翅型分化相关miRNAs的功能验证 | 第126-136页 |
| 7.1 试验材料 | 第126-127页 |
| 7.1.1 供试昆虫 | 第126-127页 |
| 7.1.2 主要试剂和仪器 | 第127页 |
| 7.1.3 MiRNA agomir设计与合成 | 第127页 |
| 7.2 试验方法 | 第127-128页 |
| 7.2.1 miR-7 agomir和miR-277 agomir的饲喂 | 第127页 |
| 7.2.2 总RNA的提取 | 第127-128页 |
| 7.2.3 PCR检测miRNAs在饲喂miRNA agomir后的表达 | 第128页 |
| 7.2.4 qRT-PCR荧光定量检测miRNA agomir的过表达 | 第128页 |
| 7.2.5 MiRNAs过表达对麦长管蚜翅型分化的影响 | 第128页 |
| 7.2.6 数据分析 | 第128页 |
| 7.3 结果与分析 | 第128-134页 |
| 7.3.1 不同浓度miRNA agomir饲喂时间的死亡率 | 第128-130页 |
| 7.3.2 总RNA提取及检测 | 第130-132页 |
| 7.3.3 PCR检测miRNAs及内参U6在各个处理样品中的扩增 | 第132页 |
| 7.3.4 人工饲喂miRNA agomir对相应mi RNAs表达量的影响 | 第132-134页 |
| 7.3.5 饲喂miRNA agomir对麦长管蚜若蚜表型的影响 | 第134页 |
| 7.4 讨论与结论 | 第134-135页 |
| 7.5 小结 | 第135-136页 |
| 第八章全文总结 | 第136-139页 |
| 8.1 主要研究结果 | 第136-137页 |
| 8.1.1 麦长管蚜两翅型不同龄期形态学的比较 | 第136页 |
| 8.1.2 外界因子对麦长管蚜翅型分化的影响 | 第136页 |
| 8.1.3 麦长管蚜miRNAs文库 | 第136-137页 |
| 8.1.4 翅型分化相关的miRNAs表达谱分析及功能研究 | 第137页 |
| 8.2 本研究的创新性 | 第137页 |
| 8.3 下一步工作展望 | 第137-139页 |
| 参考文献 | 第139-154页 |
| 致谢 | 第154-156页 |
| 作者简历 | 第156-157页 |
