| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-30页 |
| 1 病菌的生物学特性 | 第13-17页 |
| 1.1 菌核病的基本介绍 | 第13页 |
| 1.2 核盘菌的生物学特性 | 第13-15页 |
| 1.3 核盘菌致病机理 | 第15-16页 |
| 1.3.1 核盘菌对植物的入侵过程 | 第15页 |
| 1.3.2 草酸在核盘菌浸染中的重要性 | 第15-16页 |
| 1.4 油菜菌核病抗性分子机制研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4.1 转录水平研究植物对核盘菌的反应 | 第16-17页 |
| 1.4.2 蛋白组水平研究植物对核盘菌的反应 | 第17页 |
| 2 WRKY转录因子 | 第17-30页 |
| 2.1 WRKY转录因子的结构与分类 | 第18-20页 |
| 2.2 W-box | 第20-23页 |
| 2.3 WRKY转录因子互作蛋白 | 第23-27页 |
| 2.3.1 WRKY-WRKY之间的互作 | 第23页 |
| 2.3.2 WRKY蛋白与VQ蛋白之间的互作 | 第23-25页 |
| 2.3.3 WRKY转录因子与MAPK之间的互作 | 第25-26页 |
| 2.3.4 与WRKY蛋白互作的其他蛋白 | 第26-27页 |
| 2.4 WRKY转录因子的生物学功能 | 第27-30页 |
| 2.4.1 WRKY蛋白参与植物防卫反应信号的传递 | 第28页 |
| 2.4.2 WRKY转录因子在植物发育过程中的作用 | 第28-30页 |
| 第二章 转化大麦草酸氧化酶提高甘蓝型油菜菌核病抗性及其抗性机理初析 | 第30-55页 |
| 1 材料与方法 | 第30-40页 |
| 1.1 试验材料 | 第30-31页 |
| 1.2 大麦草酸氧化酶基因片段的获得及植物转化载体构建 | 第31-34页 |
| 1.3 植物转化载体转化农杆菌 | 第34页 |
| 1.4 甘蓝型油菜转基因植株的获得 | 第34-35页 |
| 1.5 草酸氧化酶酶活测定 | 第35-36页 |
| 1.6 转基因植株菌核病抗性鉴定 | 第36页 |
| 1.7 对油菜叶片用过氧化氢及脱落酸（abscisic acid, ABA）进行处理 | 第36页 |
| 1.8 检测转基因植株的过氧化氢水平与草酸盐水平 | 第36-37页 |
| 1.9 DNA提取及基于PCR水平对转基因单株的鉴定 | 第37-38页 |
| 1.10 RNA分离及定量PCR | 第38-40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-52页 |
| 2.1 植物表达载体的构建及转基因植株的获得 | 第40-41页 |
| 2.2 转基因油菜植株的获得及抗性鉴定 | 第41页 |
| 2.3 转基因植株菌核病抗性鉴定 | 第41-44页 |
| 2.4 转基因植株的草酸氧化酶酶活测定以及接种核盘菌后草酸盐含量测定 | 第44-45页 |
| 2.5 草酸氧化酶酶活的升高是与过氧化氢水平的升高是相关的 | 第45-47页 |
| 2.6 过氧化氢途径相关的基因在转基因材料中被激活 | 第47-50页 |
| 2.7 转基因植株表现出对外施ABA的敏感性 | 第50-52页 |
| 3 讨论 | 第52-55页 |
| 3.1 转BOXO基因可以高甘蓝型油菜对核盘菌的抗性 | 第52页 |
| 3.2 H_2O_2及其途径上相关基因对抗性的贡献 | 第52-54页 |
| 3.3 ABA与菌核病抗性的关系 | 第54-55页 |
| 第三章 WRKY15可以调控WRKY33对菌核病的抗性 | 第55-105页 |
| 1 材料与方法 | 第55-69页 |
| 1.1 试验材料 | 第55页 |
| 1.2 油菜水的杨酸处理及核盘菌接种 | 第55-56页 |
| 1.3 RNA提取及q PCR | 第56页 |
| 1.4 载体构建 | 第56-61页 |
| 1.4.1 过表达载体构建 | 第56-57页 |
| 1.4.2 RNAi载体构建 | 第57页 |
| 1.4.3 启动子分离及启动子载体构建 | 第57-59页 |
| 1.4.4 亚细胞定位载体构建 | 第59-60页 |
| 1.4.5 原核表达载体构建 | 第60页 |
| 1.4.6 Bradford法蛋白定量 | 第60页 |
| 1.4.7 原生质体瞬时表达载体构建 | 第60-61页 |
| 1.4.8 酵母单杂载体构建 | 第61页 |
| 1.5 油菜的农杆菌转化及PCR鉴定 | 第61-62页 |
| 1.6 拟南芥的农杆菌转化 | 第62页 |
| 1.7 转基因材料的PCR检测 | 第62页 |
| 1.8 拟南芥原生质体的转化 | 第62-63页 |
| 1.9 亚细胞定位 | 第63-64页 |
| 1.10 GUS染色 | 第64-65页 |
| 1.11 酵母文库的构建及筛库 | 第65-68页 |
| 1.12 原核表达 | 第68页 |
| 1.13 凝胶阻滞电泳 | 第68页 |
| 1.14 原生质体的瞬时表达 | 第68-69页 |
| 2 结果与分析 | 第69-98页 |
| 2.1 Bn WRKY33在染色体上的定位及序列分析 | 第69-71页 |
| 2.2 Bn WRKY33受到水杨酸和核盘菌的诱导表达 | 第71-72页 |
| 2.3 Bn WRKY33基因的亚细胞定位 | 第72-73页 |
| 2.4 Bn WRKY33参与甘蓝型油菜对菌核病的抗性 | 第73-75页 |
| 2.5 Bn WRKY33过表达提高camalexin合成途径基因的表达 | 第75页 |
| 2.6 Bn WRKY33启动子表达模式分析 | 第75-76页 |
| 2.7 Bn WRKY33启动子截短分析 | 第76-77页 |
| 2.8 酵母文库的构建及筛选 | 第77-81页 |
| 2.9 凝胶阻滞电泳体外验证Bn WRKY15、Bn WRKY33与W-box的结合 | 第81-83页 |
| 2.10 原生质体瞬时表达检测Bn WRKY15、Bn WRKY33与W-box的结合 | 第83-85页 |
| 2.11 Bn WRKY15的生物信息学分析 | 第85-86页 |
| 2.12 Bn WRKY15的表达模式 | 第86-88页 |
| 2.13 Bn WRKY15的亚细胞定位 | 第88-89页 |
| 2.14 Bn WRKY15与Bn WRKY33的转录激活活性 | 第89-91页 |
| 2.15 Bn WRKY15和Bn WRKY33的转录激活或抑制结构域的作图 | 第91-93页 |
| 2.16 Bn WRKY15对Bn WRKY33转录调控的影响机制 | 第93-95页 |
| 2.17 其他WRKY类转录因子对WRKY33的调控 | 第95-97页 |
| 2.18 Bn WRKY15过表达甘蓝型油菜表型鉴定 | 第97-98页 |
| 3 讨论 | 第98-105页 |
| 3.1 Bn WRKY33参与油菜对核盘菌的抗性 | 第98-99页 |
| 3.2 Bn WRKY33启动子上其他两个W-box的作用 | 第99-100页 |
| 3.3 Bn WRKY33参与对自身的信号放大效应 | 第100-101页 |
| 3.4 Bn WRKY15对Bn WRKY33的调控机制 | 第101-102页 |
| 3.5 Bn WRKY15对于Bn WRKY33的调控作用 | 第102-103页 |
| 3.6 Bn WRKY33在植物对环境刺激的反应中起着调控中心的作用 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 附录1 甘蓝型油菜农杆菌转化所用的培养基与试剂配方 | 第119-120页 |
| 附录2 Hoagland营养液配方 | 第120-121页 |
| 作者简介及在读期间发表论文 | 第121页 |
