| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-23页 |
| 1.1 木质纤维素乙醇概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 木质纤维素的主要组分 | 第10页 |
| 1.1.2 木质纤维素乙醇生产工艺 | 第10-12页 |
| 1.2 酿酒酵母 | 第12-13页 |
| 1.2.1 酿酒酵母简介 | 第12-13页 |
| 1.2.2 酿酒酵母表达系统 | 第13页 |
| 1.3 外源基因在酿酒酵母中的表达及其影响因素 | 第13-17页 |
| 1.3.1 外源基因在酿酒酵母中的表达及其影响因素 | 第13-15页 |
| 1.3.2 酿酒酵母表面展示表达 | 第15-17页 |
| 1.4 纤维素酶基因在酿酒酵母中表达的研究概述 | 第17-21页 |
| 1.4.1 酿酒酵母中分泌表达纤维素酶基因的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.4.2 纤维素酶基因在酿酒酵母中的表面展示表达 | 第19-20页 |
| 1.4.3 表达纤维素酶酿酒酵母菌株在利用纤维素产醇中的应用 | 第20-21页 |
| 1.5 本课题的研究目的与意义、内容及技术路线 | 第21-23页 |
| 1.5.1 研究目的与意义 | 第21页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 1.5.3 研究方法 | 第22页 |
| 1.5.4 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-31页 |
| 2.1.1 质粒、菌株与引物 | 第23-26页 |
| 2.1.2 主要的仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第27页 |
| 2.1.4 重要溶液配制 | 第27-30页 |
| 2.1.5 培养基的配制 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-41页 |
| 2.2.1 不同微生物的培养 | 第31-32页 |
| 2.2.2 CTAB法小量提取大肠杆菌质粒 | 第32-33页 |
| 2.2.3 酿酒酵母染色体的快速分离提取 | 第33页 |
| 2.2.4 PCR反应 | 第33-34页 |
| 2.2.5 DNA的酶切和连接反应 | 第34-35页 |
| 2.2.6 DNA的乙醇沉淀纯化 | 第35页 |
| 2.2.7 酿酒酵母感受态细胞的制备与转化 | 第35-36页 |
| 2.2.8 工程菌株利用纤维二糖评价 | 第36页 |
| 2.2.9 玉米芯酸碱预处理流程 | 第36-37页 |
| 2.2.10 发酵实验 | 第37页 |
| 2.2.11 HPLC测定发酵液中各组分测定及糖醇转化率计算 | 第37-38页 |
| 2.2.12 β-葡萄糖苷酶（BGL）酶活测定 | 第38页 |
| 2.2.13 内切葡聚糖酶EG酶活测定 | 第38-39页 |
| 2.2.14 刚果红染色法定性鉴定表达EG的酿酒酵母转化子 | 第39-41页 |
| 第三章 瑞氏木霉eglII基因在酿酒酵母中锚定表达影响因素研究 | 第41-55页 |
| 3.1 瑞氏木霉egl II基因锚定表达整合质粒构建 | 第41-43页 |
| 3.1.1 整合质粒载体pGEM-T-easy-H1-R-URA-R-H2的构建 | 第41-42页 |
| 3.1.2 质粒TrEGII’、TrEGII-cwp2、TrEGII-Linker-cwp2、TrEGII-AGα的构建 | 第42-43页 |
| 3.2 瑞氏木霉TrEGII基因锚定表达酿酒酵母工程菌株的构建 | 第43-45页 |
| 3.2.1 转化质粒的提取 | 第43-44页 |
| 3.2.2 酿酒酵母的转化和筛选鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3 瑞氏木霉TrEGII基因锚定表达工程菌株的分析评价 | 第45-52页 |
| 3.3.1 工程菌株在 2%葡萄糖CMG-URA培养基中好氧生长评价 | 第45-46页 |
| 3.3.2 工程菌株在 2%葡萄糖YPD培养基中好氧生长评价 | 第46页 |
| 3.3.3 工程菌株在 2%葡萄糖CMG-URA培养基中EG酶活评价 | 第46-49页 |
| 3.3.4 工程菌株在 2%葡萄糖YPD培养基中EG酶活评价 | 第49-52页 |
| 3.4 本章讨论与小结 | 第52-55页 |
| 3.4.1 本章讨论 | 第52-53页 |
| 3.4.2 小结 | 第53-55页 |
| 第四章 棘孢曲霉AaBGL基因在酿酒酵母中锚定表达的研究 | 第55-62页 |
| 4.1 β-葡萄糖苷酶AaBGL基因锚定表达酿酒酵母工程菌株的构建 | 第55-57页 |
| 4.1.1 带Agα 锚定肽的AaBGL- AGα 重组质粒的构建 | 第55-56页 |
| 4.1.2 酿酒酵母的转化和筛选鉴定 | 第56-57页 |
| 4.2 AaBGL基因锚定表达工程菌株的分析评价 | 第57-60页 |
| 4.2.1 工程菌株在 2%纤维二糖YPC培养基中好氧生长评价 | 第57-58页 |
| 4.2.2 工程菌株在 2%纤维二糖YPC培养基中BGL酶活评价 | 第58-60页 |
| 4.3 本章讨论和小结 | 第60-62页 |
| 4.3.1 本章讨论 | 第60页 |
| 4.3.2 小结 | 第60-62页 |
| 第五章 棘孢曲霉AaBGL基因在工业酿酒酵母中高效表达及发酵产醇研究 | 第62-75页 |
| 5.1 棘孢曲霉AaBGL基因高效表达工业工程菌株的构建 | 第62-64页 |
| 5.1.1 转化质粒的提取 | 第62-63页 |
| 5.1.2 酿酒酵母的转化和筛选鉴定 | 第63-64页 |
| 5.2 β-葡萄糖苷酶基因分泌表达工业工程菌株的分析评价 | 第64-72页 |
| 5.2.1 工程菌株在 2 %纤维二糖YPC培养基中厌氧生长评价 | 第64-65页 |
| 5.2.2 工程菌株在 2 %纤维二糖发酵中 β-葡萄糖苷酶酶活测定 | 第65-66页 |
| 5.2.3 工程菌株在 2 %纤维二糖发酵产醇的评价 | 第66-68页 |
| 5.2.4 工程菌株利用纤维素料发酵产醇的评价 | 第68-72页 |
| 5.3 本章讨论与小结 | 第72-75页 |
| 5.3.1 本章讨论 | 第72页 |
| 5.3.2 小结 | 第72-75页 |
| 第六章 结论与展望 | 第75-77页 |
| 6.1 结论 | 第75-76页 |
| 6.2 展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第84-85页 |
| 附录1 符号 | 第85-86页 |
| 附录2 质粒图谱 | 第86-90页 |
| 附录3 标准曲线 | 第90-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
