| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 昆虫的变态发育 | 第13-20页 |
| 1.1 昆虫变态发育过程中的激素调控 | 第13-17页 |
| 1.2 家蚕脂肪体的研究 | 第17-18页 |
| 1.3 家蚕脂肪体的组学研究 | 第18-20页 |
| 2 家蚕Hemolin与Yippee蛋白 | 第20-25页 |
| 2.1 Hemolin蛋白及其与昆虫发育的关系 | 第21-23页 |
| 2.1.1 Hemolin蛋白 | 第21-22页 |
| 2.1.2 Hemolin蛋白与昆虫发育的关系 | 第22-23页 |
| 2.2 Yippee蛋白的研究 | 第23-24页 |
| 2.3 Hemolin与Yippee之间的相互作用 | 第24-25页 |
| 第二章 家蚕变态发育过程中脂肪体蛋白表达差异的研究 | 第25-47页 |
| 2.1 实验材料和试剂 | 第26-29页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第26页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第26页 |
| 2.1.3 实验试剂及配制 | 第26-29页 |
| 2.2 实验方法与步骤 | 第29-35页 |
| 2.2.1 酚法抽提家蚕脂肪体总蛋白 | 第29-30页 |
| 2.2.2 Bradford法蛋白定量 | 第30-31页 |
| 2.2.3 第一向等电聚焦 | 第31-32页 |
| 2.2.4 第二向SDS-PAGE电泳 | 第32-33页 |
| 2.2.5 聚丙烯酰氨凝胶考染和脱色处理 | 第33-34页 |
| 2.2.6 图像处理及分析 | 第34页 |
| 2.2.7 蛋白点胶内酶解消化 | 第34-35页 |
| 2.2.8 参数设置与数据库比对 | 第35页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第35-43页 |
| 2.3.1 Bradford法蛋白定量结果 | 第35-36页 |
| 2.3.2 家蚕脂肪体二维电泳图谱 | 第36-40页 |
| 2.3.3 差异蛋白质谱鉴定结果分析 | 第40-42页 |
| 2.3.4 差异蛋白GO分析 | 第42-43页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第43-47页 |
| 第三章 家蚕变态发育过程中脂肪体差异表达蛋白RT-PCR分析 | 第47-56页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第47-49页 |
| 3.1.1 家蚕脂肪体材料收集 | 第47页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第47-48页 |
| 3.1.3 实验试剂仪器设备 | 第48页 |
| 3.1.4 引物设计 | 第48-49页 |
| 3.2 实验方法 | 第49-52页 |
| 3.2.1 Trizol法提取家蚕脂肪体组织总RNA | 第49-50页 |
| 3.2.2 RNA反转录成c DNA | 第50-52页 |
| 3.2.3 荧光定量PCR | 第52页 |
| 3.3 RT-PCR结果分析 | 第52-54页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第54-56页 |
| 第四章 家蚕yippee基因克隆、表达及多克隆抗体的制备 | 第56-74页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第56-61页 |
| 4.1.1 实验动物、载体和菌株 | 第56-57页 |
| 4.1.2 试剂 | 第57页 |
| 4.1.3 试剂配制 | 第57-60页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第60-61页 |
| 4.2 实验方法与步骤 | 第61-69页 |
| 4.2.1 家蚕蛹总RNA抽提 | 第61页 |
| 4.2.2 蛹m RNA逆转录成c DNA | 第61-63页 |
| 4.2.3 PCR扩增Bmyippee基因片段 | 第63-64页 |
| 4.2.4 重组表达载体构建 | 第64-66页 |
| 4.2.5 目的蛋白在大肠杆菌中原核表达 | 第66-67页 |
| 4.2.6 目的蛋白胶内酶解及质谱分析 | 第67页 |
| 4.2.7 蛹总蛋白提取 | 第67页 |
| 4.2.8 蛋白纯化及多克隆抗血清制备 | 第67-68页 |
| 4.2.9 Western Blot检测 | 第68-69页 |
| 4.3 结果与分析 | 第69-73页 |
| 4.3.1 Bmyippee基因扩增结果 | 第69页 |
| 4.3.2 重组载体p ET-30a-Bm Yippee鉴定 | 第69-70页 |
| 4.3.3 IPTG诱导原核表达 | 第70-71页 |
| 4.3.4 重组蛋白的质谱鉴定结果 | 第71-72页 |
| 4.3.5 多克隆抗血清鉴定 | 第72-73页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第73-74页 |
| 第五章 Hemolin与Yippee蛋白的相互作用 | 第74-86页 |
| 5.1 材料和试剂 | 第74-75页 |
| 5.1.1 实验材料和试剂 | 第74-75页 |
| 5.2 实验方法 | 第75-78页 |
| 5.2.1 家蚕翅原基样品收集 | 第75页 |
| 5.2.2 家蚕Bmhemolin全长基因的表达 | 第75-76页 |
| 5.2.3 家蚕翅原基组织中Hemolin与Yippee蛋白的相互作用 | 第76-77页 |
| 5.2.4 原核表达的Hemolin蛋白与Yippee蛋白的相互作用 | 第77-78页 |
| 5.3 结果与分析 | 第78-84页 |
| 5.3.1 重组载体p ET-30a-Bm Hemolin鉴定 | 第78-79页 |
| 5.3.2 重组载体p ET-30a-Bm Hemolin原核表达 | 第79-80页 |
| 5.3.3 翅原基总蛋白SDS – PAGE凝胶电泳检测 | 第80-81页 |
| 5.3.4 原核Hemolin蛋白与Yippee蛋白的相互作用 | 第81-82页 |
| 5.3.5 家蚕翅原基组织中Hemolin与Yippee蛋白相互作用验证 | 第82-84页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第84-86页 |
| 第六章 总结与展望 | 第86-87页 |
| 6.1 主要工作总结 | 第86页 |
| 6.2 工作展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-97页 |
| 致谢 | 第97-99页 |
| 在学期间发表的论文及参加的课题 | 第99-100页 |
| 附录 | 第100-113页 |
