| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 丝状真菌蛋白分泌 | 第13-14页 |
| 1.1.1 内质网 | 第13页 |
| 1.1.2 高尔基体 | 第13-14页 |
| 1.1.3 小泡运输 | 第14页 |
| 1.2 未折叠蛋白响应 | 第14-15页 |
| 1.3 Hac1基因 | 第15-17页 |
| 1.4 r-PA基因 | 第17页 |
| 1.5 转录组测序 | 第17-19页 |
| 1.5.1 测序技术发展 | 第17-18页 |
| 1.5.2 转录组测序方法 | 第18-19页 |
| 1.6 研究的目标意义 | 第19页 |
| 1.7 研究内容 | 第19-20页 |
| 1.8 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 Hac1荧光过表达菌株的构建 | 第21-34页 |
| 2.1 试验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.3 常用缓冲液、试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 斜卧青霉的培养和基因组提取 | 第23页 |
| 2.2.2 Hac1激活形式基因（Hac1i）的扩增 | 第23-25页 |
| 2.2.3 Hac1激活形式基因（hac1i）随机插入表达盒的构建 | 第25-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-32页 |
| 2.3.1 基因组DNA的质量 | 第28页 |
| 2.3.2 斜卧青霉基因组总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.3.3 Hac1激活形式基因随机插入表达盒的构建 | 第29-32页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 外源蛋白r-PA过表达菌株的构建 | 第34-41页 |
| 3.1 试验材料 | 第34页 |
| 3.1.1 试验菌株 | 第34页 |
| 3.2 试验方法 | 第34-36页 |
| 3.2.1 外源蛋白r-PA过表达盒的构建 | 第34-36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-39页 |
| 3.3.1 表达盒各部件的克隆 | 第36-37页 |
| 3.3.2 表达盒的组装 | 第37页 |
| 3.3.3 原生质体转化及转化子鉴定 | 第37-39页 |
| 3.3.4 r-PA的胞外酶活性检测 | 第39页 |
| 3.3.5 野生菌株与过表达菌株的形态学比较 | 第39页 |
| 3.4 结论与分析 | 第39-41页 |
| 第四章 荧光定量PCR对转录水平的检测 | 第41-46页 |
| 4.1 试验材料 | 第41-42页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第41页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第41-42页 |
| 4.2 试验方法 | 第42-43页 |
| 4.2.1 模板质粒的定量 | 第42页 |
| 4.2.2 模板质粒的稀释 | 第42页 |
| 4.2.3 实时荧光定量PCR标准曲线的制作 | 第42-43页 |
| 4.2.4 溶解曲线分析 | 第43页 |
| 4.2.5 总RNA的提取 | 第43页 |
| 4.2.6 cDNA的合成 | 第43页 |
| 4.2.7 各菌株基因表达的实时荧光定量PCR分析 | 第43页 |
| 4.3 结果分析 | 第43-45页 |
| 4.3.1 荧光定量标准曲线的制作 | 第43-44页 |
| 4.3.2 野生菌株与构建菌株不同时间点基因表达分析 | 第44-45页 |
| 4.4 结论与分析 | 第45-46页 |
| 第五章 野生、Hac1过表达和r-PA过表达菌株转录组差异分析 | 第46-64页 |
| 5.1 试验材料 | 第46页 |
| 5.1.1 菌株 | 第46页 |
| 5.2 方法 | 第46-47页 |
| 5.2.1 RNA样品的准备及测序 | 第46页 |
| 5.2.2 差异表达基因筛选 | 第46页 |
| 5.2.3 差异表达基因功能分析 | 第46-47页 |
| 5.3 实验结果 | 第47-62页 |
| 5.3.1 各样品测序质量分析 | 第47-48页 |
| 5.3.2 新转录本预测和注释 | 第48-49页 |
| 5.3.3 可变剪接 | 第49-50页 |
| 5.3.4 SNP (单核苷酸多态性)分析 | 第50-51页 |
| 5.3.5 野生菌株 114-2 与荧光过表达菌株Hac1-YGSJ转录差异分析 | 第51-56页 |
| 5.3.6 野生菌株 114-2 与外源蛋白过表达菌株rPA转录差异分析 | 第56-60页 |
| 5.3.7 菌株Hac-YGSJ与菌株rPA转录差异分析 | 第60-62页 |
| 5.4 结论与分析 | 第62-64页 |
| 第六章 主要结论 | 第64-66页 |
| 6.1 主要结论 | 第64-65页 |
| 6.2 研究不足 | 第65页 |
| 6.3 研究展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72页 |
